日本血吸蟲童蟲細胞高保護性免疫學機制的初步研究.pdf

1、第一章S.j童蟲活細胞與UV致弱尾蚴免疫誘生的保護性差異
　　 [目的]以兩種日本血吸蟲易感小鼠為動物模型，比較日本血吸蟲（S.j）童蟲細胞型疫苗和UV致弱尾蚴疫苗所誘導(dǎo)的保護性差異。[方法]細胞型疫苗的制備:用S.j尾蚴感染家兔后收集12d童蟲，酶消化法制備童蟲活細胞作為免疫原。動物分組:取40只雌性昆明鼠和40只雌性Balb/c鼠隨機分為8組。D1組:童蟲細胞免疫昆明鼠組;E1組:UV致弱尾蚴免疫昆明鼠組;F1組:PBS注射

2、昆明對照組;F1'組:NS腹部貼片昆明對照組;D2組:童蟲細胞免疫Balb/c組;E2組:UV致弱尾蚴免疫Balb/c組;F2組:PBS注射Balb/c對照組;F2'組:NS腹部貼片Balb/c對照組。動物免疫及攻擊:D1組和D2組每鼠經(jīng)后腿雙側(cè)腹股溝皮下注射接種免疫原，隔2周一次，共免疫3次，F(xiàn)1和F2組每鼠注射PBS;用紫外照射致弱處理S.j尾蚴，按400尾致弱尾蚴/鼠貼片法免疫E1、E2組小鼠各一次，而F1'組和F2'組則貼沾有生

3、理鹽水的玻片一次;于末次細胞免疫后第2周或致弱尾蚴免疫第6周用30±1尾/鼠正常尾蚴對各組小鼠進行攻擊感染。于感染后第42d剖殺小鼠，計數(shù)各鼠蟲荷、每克肝卵荷(liver eggs pergram，LEPG)，測量經(jīng)HE染色后的肝蟲卵肉芽腫的大小。[結(jié)果]昆明鼠中，D1組獲得了45.9％的減蟲率和62.9％LEPG減少率，肝蟲卵肉芽腫平均直徑和面積分別減少39.6％和63.7％; E1組獲得53.3％的減蟲率和62.4％LEPG減少率，

4、肝蟲卵肉芽腫平均直徑和面積分別減少42.7％和67.2％;兩免疫組相比較顯示，E1組的減蟲率明顯高于D1組(P＜0.05)，但其余指標均無明顯差異(P＞0.05);在Balb/c鼠實驗中，D2組獲得了56.3％的減蟲率和57.1％LEPG減少率，肝蟲卵肉芽腫平均直徑和面積分別減少42.4％和66.9％; E2組獲得49.5％的減蟲率和42.7％LEPG減少率，肝蟲卵肉芽腫平均直徑和面積分別減少31.4％和52.9％;兩免疫組相比較顯示，

5、D2組的各項指標均高于E2組（P＜0.05）。[結(jié)論]S.j童蟲細胞免疫和UV致弱尾蚴免疫均能誘導(dǎo)兩易感株鼠產(chǎn)生理想的保護性效果，并且童蟲細胞免疫能夠產(chǎn)生同等甚至高于致弱尾蚴的保護效果。
　　 第二章S.j童蟲活細胞免疫與UV致弱尾蚴免疫誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生保護性機制分析
　　 [目的]通過探討S.j童蟲細胞免疫和UV致弱尾蚴免疫誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答特點，分析和比較S.j童蟲細胞免疫和UV致弱尾蚴免疫誘導(dǎo)高保護性機制。[方法]實驗的分

6、組同第一章，間接ELISA檢測各組鼠血清中抗S.j可溶性童蟲抗原(soluble juvenile worm antigens，SJWA)的IgG、IgG1、IgG2a抗體水平[結(jié)果]ELISA結(jié)果顯示:在昆明組中，D1組和E1組均產(chǎn)生了明顯高于對照組的抗SJWA-IgG水平，在第一次免疫到攻擊感染之間，D1組產(chǎn)生的IgG水平顯著高于E1組（P＜0.05），而在攻擊感染后，E1組的IgG水平上升的更快，并且在12w顯著大于D2組（P＜0

7、.05），D1組和E1組均產(chǎn)生了較高抗SJWA的IgG1和IgG2a水平，并且D1、E1的IgG2a/IgG1的比值均大于1，D1的IgG2a/IgG1比值由攻擊感染前的2.03下降到1.81，而E1的IgG2a/IgG1由攻擊感染前的1.73上升至2.23;Balb/c鼠實驗中，D2組和E2組同樣均產(chǎn)生了明顯高于正常對照組的抗SJWA-IgG水平，在攻擊前兩免疫組IgG水平并無顯著性差異（P＞0.05），在攻擊感染后D2組的IgG水平

8、逐漸高于E2組（P＞0.05），兩免疫組血清中的IgG2a和IgG1均有較大的升高，IgG2a升高的更未明顯(IgG2a/IgG1＞1)，E2組的IgG2a/IgG1比值在攻擊感染后有一定的上升，而D2組的并無顯著變化。[結(jié)論]Sj童蟲細胞免疫和UV致弱尾蚴免疫均能誘導(dǎo)兩組不同的易感小鼠產(chǎn)生較高的抗攻擊感染免疫應(yīng)答水平，IgG1和IgG2a水平增高以及IgG2a/IgG1比值提示兩免疫均能產(chǎn)生以細胞免疫為主的混合免疫反應(yīng)。
　　

9、 第三章S.j血吸蟲童蟲活細胞免疫母鼠的子代抗攻擊感染保護性研究
　　 [目的]以兩種日本血吸蟲易感小鼠為動物模型，探討S.j童蟲細胞免疫母鼠的子代鼠抗日本血吸蟲攻擊感染的應(yīng)答水平。[方法]用S.j童蟲細胞分別免疫昆明母鼠和Balb/c母鼠，將免疫母鼠或正常母鼠與相應(yīng)鼠種的正常公鼠配對飼養(yǎng)，用其子代鼠建立兩個感染模型共4組（A1:免疫昆明子代組;B1:正常昆明子代對照組;A2:免疫Balb/c子代組;B2:正常Balb/c子代對

10、照組）;計數(shù)四組鼠經(jīng)S.j尾蚴攻擊感染后獲得的蟲荷和LEPG;測量小鼠經(jīng)HE染色后的肝組織切片內(nèi)蟲卵肉芽腫的大小;間接ELISA檢測各組子代鼠血清中抗SJWA-IgG水平。[結(jié)果]與正常子代組相比，兩組S.j童蟲活細胞免疫母鼠子代均表現(xiàn)出不同程度的抗攻擊感染的免疫力，尤其抗生殖效果顯得尤為突出。其中，A1獲得35.6％的減蟲率和59.4％的LEPG減卵率;A2獲得29.8％的減蟲率和47.4％的LEPG減少率。從肝臟外表來看，B1、B2

11、組子代對照鼠肝臟的壞死程度明顯高于A1、A2免疫子代鼠。此外，A1組肝臟蟲卵肉芽腫平均直徑和面積比B1組分別減少23.8％和43.4％，A2組肝臟蟲卵肉芽腫平均直徑和面積較B2組減少28.4％和50.3％。A1、A2與B1、B2各指標結(jié)果的組間差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05）。ELISA結(jié)果顯示，不同時間點采集的兩株免疫子代鼠血清中的IgG水平高于同期相應(yīng)對照組血清中的IgG水平。[結(jié)論]用S.j童蟲細胞接種母鼠所誘生的保護性免疫有