日本血吸蟲中間宿主的遺傳學(xué)及免疫學(xué)研究.pdf

1、目的:研究日本血吸蟲(Schistosome japonicum)中間宿主湖北釘螺(Oncomelaniahupensis)生物學(xué)特性、血淋巴細(xì)胞大量獲取的方法學(xué)、血淋巴細(xì)胞的形態(tài)學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)特性，以進(jìn)一步揭示日本血吸蟲攻擊并感染釘螺的侵入機(jī)制及其自身保護(hù)性機(jī)制，研究釘螺分類、遺傳特性及篩選抗性株釘螺，為血吸蟲病流行病學(xué)調(diào)查研究、血吸蟲病防治策略的制訂提供理論依據(jù)。 方法:參照外周淋巴器官中淋巴細(xì)胞的懸浮收集法，獲取釘螺血淋

2、巴細(xì)胞，Giemsa染色后觀察其形態(tài)。血淋巴細(xì)胞經(jīng)結(jié)晶紫染色后分別計(jì)數(shù)懸浮法、傳統(tǒng)壓片法及針刺法獲取的血淋巴細(xì)胞數(shù)，并對(duì)其進(jìn)行方差分析和Dunnett-t檢驗(yàn)。取凍融的血淋巴細(xì)胞上清進(jìn)行免疫沉淀、抑菌、吞噬殺菌實(shí)驗(yàn)。十二烷基磺酸鈉.聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析血淋巴細(xì)胞蛋白組份相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)。凝膠層析純化分離釘螺血淋巴細(xì)胞蛋白。RMBI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)釘螺血淋巴細(xì)胞。將秋水仙素作用后的釘螺血淋巴細(xì)胞進(jìn)行低滲、固定、

3、氣干法制片和染色，顯微鏡下閱片，進(jìn)行染色體核型分析。 結(jié)果: (1)釘螺血淋巴細(xì)胞分為圓形有絲狀偽足、嗜酸性圓形無(wú)絲狀偽足、嗜堿性圓形無(wú)絲狀偽足和梭形細(xì)胞4種形態(tài)，平均直徑依次約為10.93、6.13、6.08及11.06 μm，分別約占細(xì)胞總數(shù)的50％、30％、5％及15％。每只釘螺懸浮法、傳統(tǒng)壓片法及針刺法獲取的血淋巴細(xì)胞均數(shù)分別為1.50、0.66及0.03×10<'4>/ml。 (2)懸浮法與傳統(tǒng)壓片法、針刺法總

4、體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=281.47，P<0.01)。進(jìn)一步Dunnett-t檢驗(yàn)，懸浮法與壓片法、懸浮法與針刺法的總體均數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t<,1>=15.67，t<,2>=24.50，兩組P<0.01)。 (3)凍融的血淋巴細(xì)胞上清，與日本血吸蟲蟲卵可溶性抗原(SEA)反應(yīng)出現(xiàn)絮狀沉淀。 (4)抑菌試驗(yàn)血淋巴細(xì)胞上清對(duì)金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌出現(xiàn)明顯的抑菌圈。 (5)血淋巴細(xì)胞對(duì)白色念珠菌的吞噬率和殺

5、菌率分別為86％、46％。 (6)血淋巴細(xì)胞蛋白組份相對(duì)分子質(zhì)量約為Mr 112 300、107 100、97 200、73 500、60 000及12 000。 (7)凝膠層析分離純化釘螺血淋巴細(xì)胞蛋白得到兩個(gè)主峰。 (8)PddBI1640培養(yǎng)釘螺血淋巴細(xì)胞因取材污染未能培養(yǎng)成功。 (9)湖北釘螺的染色體數(shù)2n=34，核型公式為14m+8Sm+8St+2t+性染色體。 結(jié)論:懸浮法可獲得大量釘

6、螺血淋巴細(xì)胞，其具有沉淀SEA、抑制金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌生長(zhǎng)及吞噬殺滅白色念珠菌等免疫功能。SDS-PAGE顯示釘螺血淋巴細(xì)胞蛋白Mr約為112 300，107 100，972 00，73 500，600 00，12 000。凝膠層析發(fā)現(xiàn)釘螺血淋巴細(xì)胞蛋白有兩個(gè)主峰。用釘螺血淋巴細(xì)胞氣干法制備染色體標(biāo)本，方法簡(jiǎn)便，增加有絲分裂中期核型，圖像清晰，染色體伸展，形態(tài)良好，著絲粒位置明顯，可讀性好，便于進(jìn)行核型分析。對(duì)釘螺血淋巴細(xì)胞的研