感染日本血吸蟲引起宿主循環(huán)MicroRNAs表達變化的研究.pdf

1、日本血吸蟲病是人獸共患，嚴重的危害了人類和動物健康。雖然，我國血吸蟲病的防控取得了舉世矚目的成就，但是隨著近來氣候變暖、生態(tài)和經(jīng)濟社會等因素的變化，血吸蟲病防控又面臨諸多新的挑戰(zhàn)。為了更好的控制血吸蟲病，需要利用現(xiàn)代分子生物技術(shù)系統(tǒng)研究血吸蟲病原生物學，深入揭示血吸蟲感染和寄生蟲的分子機理，開拓血吸蟲病防控的新途徑。
　　本論文主要研究了感染了日本血吸蟲后終末宿主體內(nèi)循環(huán)性microRNAs的變化，主要分為以下兩方面:1）感染日本

2、血吸蟲宿主體內(nèi)循環(huán)microRNAs（Circulating microRNAs）序列測定以及靶基因功能預(yù)測分析;2）qRT-PCR驗證分析。具體如下:
　　一、利用生物信息學方法對獲得小RNAs序列進行系統(tǒng)分析，鑒定與血吸蟲感染相關(guān)的循環(huán)性miRNAs并預(yù)測其功能。在本研究中，兩次生物學重復(fù)實驗中共發(fā)現(xiàn)173條miRNAs差異表達。
　　進一步分析表明感染后有64個已知miRNAs在P1和P2呈現(xiàn)差異表達（差異倍數(shù)在兩倍以

3、上），其中12個下調(diào)，52個上調(diào)。將P1與P2（P1:感染后14、28天后大白兔血漿所建的庫;P2:感染后10、14、28、32天后大白兔血漿所建的庫）分別與未感染的家兔血漿小RNA庫進行比對，獲得感染后特有的小RNAs并進行分類分析。對未注釋的特異性的小RNA進行新miRNAs預(yù)測，結(jié)果表明P1有191條新miRNAs，P2中有190條新miRNAs。對感染后宿主特異性表達的循環(huán)miRNAs以人的數(shù)據(jù)庫為參考進行靶基因預(yù)測，結(jié)果表明在

4、124個miRNAs中按照最嚴謹?shù)臈l件（只考慮五個軟件都能預(yù)測到的靶基因），我們共獲得了18個miRNAs以及它們所調(diào)控的共416條靶基因。用David數(shù)據(jù)庫提供的在線工具Pather進行了靶基因GO聚類分析，結(jié)果表明主要參與包括細胞進程、代謝調(diào)控、生命調(diào)控、發(fā)育進程等生物學進程。分子功能分析表明主要參與結(jié)合、催化活性等分子功能。KEGG代謝調(diào)控分析表明，這些miRNAs主要與信號調(diào)節(jié)通路相關(guān)如有13個靶基因參與了整聯(lián)素信號通路，9個參