核酸檢測技術在日本血吸蟲感染宿主早期診斷及療效考核中的應用研究.pdf

1、本研究擬在課題組在已成功建立PCR法檢測日本血吸蟲特異性DNA的研究基礎上，進一步探索核酸檢測技術在日本血吸蟲病早期診斷及療效考核中的應用。首先驗證了PCR法對日本血吸蟲感染家兔模型的不同組織樣本(包括日本血吸蟲成蟲、蟲卵、感染家兔的肝組織、糞便和外周血清)中日本血吸蟲特異性DNA的檢測結果，且進一步確定了PCR法檢測的敏感性和特異性，結果顯示其敏感性為80fg/μL的DNA水平，所檢測的DNA片段是日本血吸蟲特異的，與曼氏血吸蟲及華支

2、睪吸蟲均無交叉反應。對感染家兔的血清DNA的檢測結果證明了PCR法對日本血吸蟲感染的早期診斷和療效考核價值，即可從感染后第1w的血清中擴增出特異條帶，于治療后第12w即轉為陰性，與以往研究結果基本一致。 在已建立的PCR法的基礎上，本研究進一步建立了一種新型快速、靈敏的核酸檢測法，即環(huán)媒介導的恒溫擴增法(簡稱LAMP法)，并與PCR法比較檢測的敏感性和特異性，結果表明，LAMP法的敏感性顯著高于PCR法，約為PCR法的104倍，

3、可擴增出極微量水平的DNA(0.08fg／μl)，亦未見與曼氏血吸蟲、華支睪吸蟲的交叉反應。在日本血吸蟲感染家兔模型的早期診斷和療效考核的實驗中，LAMP法同樣可從感染后第1w的血清中檢測出陽性結果，對療效考核的評價表明LAMP法在治療后第13w時即轉為陰性，較PCR法晚一周轉陰，顯示出其具有更高的敏感性。 為深入探討日本血吸蟲感染宿主血清中核酸物質(zhì)的來源，本實驗建單、雙性感染小鼠模型進行研究。結果初步證實在日本血吸蟲感染早期，

4、血清中的核酸物質(zhì)可能主要來源于移行過程中死亡的童蟲以及蟲體發(fā)育過程中更新脫落的表皮組織，而在感染的急性期和慢性期，小鼠血清中的核酸物質(zhì)可能主要來源于蟲卵的分解產(chǎn)物。從而為應用核酸檢測法早期診斷日本血吸蟲感染，尤其是為療效考核提供了理論依據(jù)。 在動物模型實驗研究的基礎上，應用兩種核酸檢測法檢測了30例日本血吸蟲病慢性期病人血清。結果顯示，PCR法可從30例病人血清中檢測出18例陽性結果，陽性率為60％，而LAMP法可檢測出29例陽