利用日本血吸蟲(chóng)重組信號(hào)蛋白14-3-3檢測(cè)血吸蟲(chóng)抗原及抗體的研究.pdf

1、目的:制備日本血吸蟲(chóng)(中國(guó)大陸株)重組信號(hào)蛋白14-3-3(rSj14-3-3),并制備抗rSj14-3-3蛋白的單克隆抗體和多克隆抗體,探討純化的rSj14-3-3蛋白及其相應(yīng)的單克隆抗體和多克隆抗體對(duì)日本血吸蟲(chóng)病的診斷價(jià)值。
　　方法:通過(guò)對(duì)含有重組質(zhì)粒pET28a-Sj14-3-3的工程菌E.coli BL21的誘導(dǎo)培養(yǎng),制備rSj14-3-3蛋白,以蛋白純化試劑盒(His-Bind Purification Kit)予以純

2、化,獲得高純度的rSj14-3-3蛋白,以純化后的rSj14-3-3蛋白為抗原免疫Balb/c小鼠,用雜交瘤技術(shù)制備抗rSj14-3-3蛋白的單克隆抗體并予以純化。通過(guò)間接ELISA方法測(cè)定單克隆抗體的效價(jià),并用Western blotting鑒定單克隆抗體的特異性。同時(shí),以純化后的rSj14-3-3蛋白為抗原免疫家兔,制備抗rSj14-3-3蛋白的抗血清并予以純化,制備相應(yīng)的多克隆抗體,用間接ELISA法測(cè)定多克隆抗體的效價(jià)。以純化的

3、rSj14-3-3抗原用間接ELISA法分別對(duì)30例急性血吸蟲(chóng)病患者、30例慢性血吸蟲(chóng)病患者和50例健康人血清中的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè);用純化的抗rSj14-3-3多克隆抗體為捕捉系統(tǒng),以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的單克隆抗體HRP-1D4為檢測(cè)系統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)上述急、慢性血吸蟲(chóng)病患者和健康人血清中的循環(huán)抗原。
　　結(jié)果:獲得了高純度的rSj14-3-3蛋白抗原;篩選出了能夠穩(wěn)定分泌抗rSj14-3-3單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株1D

4、4,其單克隆抗體的亞型經(jīng)鑒定為IgG1,抗體的效價(jià)在107以上。通過(guò)間接ELISA法分別對(duì)30例急性血吸蟲(chóng)病患者和30例慢性血吸蟲(chóng)病患者血清中的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè),陽(yáng)性率分別為100％(30/30)和96.7％(29/30);雙抗夾心ELISA法分別對(duì)上述急、慢性血吸蟲(chóng)病患者血清中的循環(huán)抗原進(jìn)行檢測(cè),陽(yáng)性率分別為73.3％(22/30)和53.3％(16/30),這兩種方法對(duì)50例健康人血清進(jìn)行檢測(cè)的陽(yáng)性率均為0(0/50)。