日本血吸蟲DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的代謝及時空表達規(guī)律研究.pdf

1、血吸蟲病是一種世界性的寄生蟲傳染性疾病，被列為世界十大惡性傳染病之一，對人類及家畜的安全都具有極大的危害，是許多國家和地區(qū)政府都非常重視的公共安全問題。常規(guī)的預防和治療手段難以遏制形勢日益嚴峻的血吸蟲疫情，疫苗作為一種良好的防治兼顧的措施，其研發(fā)具有重大的經(jīng)濟和社會價值。
　　 DNA疫苗是近20年才出現(xiàn)的疫苗概念，被譽為“第三代疫苗”，與常規(guī)的第一、二代疫苗相比具有顯著的優(yōu)勢。至今已有近百種針對各種重大疾病的DNA疫苗處于實驗

2、室或臨床研發(fā)階段，其中已有四種獸用DNA疫苗被批準上市，但尚無DNA疫苗產(chǎn)品被批準用于人，概其原因主要是DNA疫苗的安全性評價體系尚缺乏規(guī)范的標準。本研究以日本血吸蟲DNA疫苗為對象，旨在研究DNA疫苗在動物體內(nèi)的分布和代謝規(guī)律。通過將綠色熒光蛋白EGFP基因和日本血吸蟲抗原Sj23基因共同插入真核表達質(zhì)粒pVIVO2中，構(gòu)建了共表達和融合表達的DNA疫苗，應用PCR檢測技術(shù)、熒光激發(fā)顯色技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）技術(shù)，分別在DN

3、A水平，抗原水平和抗體水平上研究了DNA疫苗在動物體內(nèi)的分布，表達及代謝規(guī)律，為血吸蟲DNA疫苗的臨床研究提供實驗依據(jù)和數(shù)據(jù)支持。
　　 本研究初步取得了以下成果：
　　 (1)應用重組PCR技術(shù)成功構(gòu)建了日本血吸蟲23 Kda膜內(nèi)在蛋白抗原Sj23基因和綠色熒光蛋白EGFP基因共表達的DNA疫苗pVIVO2-Sj23/EGFP和融合表達DNA疫苗pVIVO2-Sj23.EGFP，并進行了酶切和測序驗證。
　　

4、(2)應用陽離子脂質(zhì)體介導DNA疫苗轉(zhuǎn)染人胚腎癌細胞系(HEK-293)進行體外表達驗證，結(jié)果表明構(gòu)建的DNA疫苗可以在真核細胞中正確表達。
　　 (3)采用高鹽變性蛋白初步純化和色譜柱串聯(lián)精細純化等方法純化DNA疫苗，制備了醫(yī)藥級別的DNA疫苗產(chǎn)品。
　　 (4)肌肉注射DNA疫苗免疫BALB/c小鼠，利用PCR技術(shù)檢測DNA疫苗在小鼠體內(nèi)的生物分布，熒光顯微鏡檢測抗原蛋白的表達分布，ELISA檢測DNA疫苗誘發(fā)抗體的