多價(jià)血吸蟲蛋白疫苗的優(yōu)選與原核表達(dá)研究.pdf

1、血吸蟲病是一種世界性的傳染性疾病,它嚴(yán)重危害著人類的生命健康,阻礙社會(huì)發(fā)展,常規(guī)的預(yù)防和治療手段難以遏制形勢(shì)日益嚴(yán)峻的血吸蟲疫情,研制血吸蟲疫苗是預(yù)防血吸蟲病最有效的方法之一。目前血吸蟲蛋白疫苗和血吸蟲核酸疫苗是主要的兩種疫苗形式。血吸蟲核酸疫苗能夠?yàn)閷?shí)驗(yàn)動(dòng)物提供一定的免疫保護(hù)力,然而其安全性在短時(shí)間內(nèi)還無(wú)法得到確認(rèn)。與核酸疫苗相比,蛋白疫苗的技術(shù)較為成熟,且其安全性得到驗(yàn)證,因此血吸蟲蛋白疫苗有可能首先實(shí)行產(chǎn)業(yè)化。血吸蟲蛋白疫苗有單價(jià)

2、蛋白疫苗和多價(jià)蛋白疫苗形式,生產(chǎn)多價(jià)蛋白疫苗可以減少生產(chǎn)成本和簡(jiǎn)化生產(chǎn)工藝。然而,利用基因工程技術(shù)生產(chǎn)多價(jià)蛋白疫苗時(shí),是否因?yàn)榈鞍兹诤现笃芜^(guò)大而影響其合成是一個(gè)需要研究的問(wèn)題。為此,本研究建立了血吸蟲蛋白疫苗原核表達(dá)系統(tǒng),對(duì)單價(jià)蛋白疫苗和多價(jià)蛋白疫苗的原核表達(dá)進(jìn)行了深入的研究,取得了以下實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
　　(1)根據(jù)WHO提供的血吸蟲疫苗候選抗原以及利用生物信息學(xué)方法分析抗原的疏水性和高級(jí)結(jié)構(gòu),篩選出合適的血吸蟲抗原基因( Sj2

3、6, SjGAPDH, Sj26.GAPDH)來(lái)進(jìn)行研究。
　　(2)克隆到了日本血吸蟲單價(jià)抗原基因Sj26和SjGAPDH以及融合抗原基因Sj26.GAPDH,利用分子生物學(xué)方法將抗原基因連接到原核表達(dá)載體上,構(gòu)建成原核表達(dá)系統(tǒng),經(jīng)酶切驗(yàn)證和測(cè)序驗(yàn)證,表明構(gòu)建成功。通過(guò)鎳離子層析柱的親和層析來(lái)對(duì)目的蛋白進(jìn)行分離純化,并且摸索出鎳離子層析柱的最佳洗脫條件。
　　(3)利用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)對(duì)分離得到的單價(jià)日本血吸