血吸蟲蟲卵特異性抗原的真核表達(dá)及應(yīng)用研究.pdf

1、血吸蟲是一種重要的人體寄生蟲,流行于74個(gè)國家和地區(qū),所引起的血吸蟲病嚴(yán)重危害人類健康。
　　 蟲卵是血吸蟲的主要致病階段,在血吸蟲致病與調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答中起重要的作用。以往的研究多采用全蟲卵、可溶性的蟲卵抗原(粗制抗原)、通過電泳及層析分離的組份抗原或在大腸桿菌中原核表達(dá)的抗原為主,存在一定的缺陷。我們在前期工作的基礎(chǔ)上,篩選出7個(gè)在日本血吸蟲蟲卵中特異性表達(dá)或高表達(dá)的基因:SJCHGC01695(SjE16)、SJCHGC0

2、0856(IMA8)、SJCHGC06249(TOR)、SJCHGC06324(P40)、SJEFTD02(SLP)、SJCHGC06679(Sj8H)和SJCHGC06529(Sj13H),以Pichia真核表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行了克隆、表達(dá)和純化,最終成功獲得3個(gè)重組蛋白(rSjE16,rSj8H和rSj13H)。經(jīng)SDS-PAGE和Western Blot鑒定,重組蛋白的分子量大小與預(yù)期值相符,且能與抗His抗體及日本血吸蟲感染小鼠血清中的

3、特異性抗體產(chǎn)生特異性反應(yīng),具有良好的抗原反應(yīng)性,為進(jìn)一步深入研究這些基因的功能奠定了基礎(chǔ)。
　　 血吸蟲感染人體后可通過抑制或調(diào)節(jié)宿主的免疫應(yīng)答,對宿主的免疫反應(yīng)產(chǎn)生影響。Th2型反應(yīng)在血吸蟲感染與免疫中起著主導(dǎo)的作用。在血吸蟲感染中,Th2型免疫反應(yīng)主要由蟲卵誘導(dǎo)產(chǎn)生,感染后隨著蟲卵的產(chǎn)生和成熟,宿主的免疫應(yīng)答類型由Th1型向Th2型偏移,提示蟲卵中的某些成分在調(diào)節(jié)宿主免疫應(yīng)答中起了重要的作用。我們研究了重組蛋白SjE16對細(xì)

4、胞增殖、細(xì)胞因子分泌格局的影響,結(jié)果發(fā)現(xiàn),rSjE16在體外可顯著抑制抗CD3抗體引發(fā)的T細(xì)胞增殖,在體內(nèi)外均能促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子IL-10的分泌,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答類型向Th2型偏移。但其對Th1型免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用并不明顯。這為我們進(jìn)一步了解血吸蟲感染后調(diào)節(jié)宿主免疫反應(yīng)的機(jī)制提供了幫助。
　　 血吸蟲感染后,可通過調(diào)節(jié)宿主體內(nèi)Th1和Th2型免疫反應(yīng),誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生Th1/Th2偏移,來影響宿主的免疫功能。血吸蟲感染可抑制Th1型

5、自身免疫病,其確切機(jī)制目前尚不十分明確,但種種跡象顯示蟲卵中的某些物質(zhì)可能在控制自身免疫病中發(fā)揮了一定的作用。我們將rSjE16應(yīng)用于Th1型自身免疫病的動物模型-小鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimenta]autoimmune encephalomyelitis,EAE),觀察其對EAE發(fā)病的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),rSjE16能明顯緩解EAE的發(fā)病,小鼠體內(nèi)的致病性自身反應(yīng)性T細(xì)胞反應(yīng)頻率明顯減低,提示rSjE16可以通過一定的途

6、徑抑制EAE發(fā)病,為自身免疫病的治療和藥物的研發(fā)提供了一個(gè)新的思路。
　　 通過基因重組法獲得的抗原,純度較高,并且能夠大量生產(chǎn),不僅可以解決大量診斷抗原的來源,而且也有利于檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化。我們將所獲得的rSjE16、rSj8H和rSj13H分別作為診斷抗原,用ELISA法檢測了感染小鼠與急慢性日本血吸蟲病病人血清中的特異性抗體。結(jié)果發(fā)現(xiàn),三種重組抗原檢測的特異性和敏感性與SEA檢測結(jié)果相比無明顯差異,可替代蟲源性抗原SEA用