小鼠血吸蟲病肝組織中內皮細胞特異性分子-1的表達及黃芪總苷對其影響.pdf

1、目的：研究內皮細胞特異性分子-1(endothelial cell specific molecule-1，ESM-1)在小鼠正常肝組織及血吸蟲病肝組織中不同時期的表達、分布及其作用，并且觀祭黃芪總苷(astrogalosides，AST)對血吸蟲病肝組織中病理形態(tài)學變化及ESM-1表達的影響。 方法：將釘螺孵育后逸出的中國大陸株日本血吸蟲尾蚴，以蓋玻片法經小鼠腹部皮膚攻擊感染，總計感染120只ICR.小鼠，每只小鼠感染30

2、1條日本血吸蟲尾蚴。實驗小鼠造模35d后隨機分為AST高劑量(20mg/kg.d)組、AST。低劑量(10mg/kg.d)組、陽性藥(護肝片，540mg/kg.d)組、模型組，每組30只，灌胃給藥1次/d。實驗小鼠均于感染血吸蟲尾蚴40d后以吡喹酮(500mg/kg.d)治療2 d，藥物均以5g/L羧甲基纖維素鈉為溶媒，10 ml/kg-d灌胃。正常對照組為30只健康鼠。模型組和正常組均以等量5 g/L羧甲基纖維素鈉灌胃。分別于感染后第

3、6、lO、14wk末每組隨機處死lO只小鼠，取肝臟組織作常規(guī)病理學檢查，并制作組織芯片；應用HE和天狼猩紅染色法觀察小鼠蟲卵結節(jié)大小及纖維化程度；采用免疫組織化學和原位分子雜交技術檢測ESM-1 mRNA及蛋白，免疫組織化學染色結果以細胞質中出現明顯黃色或黃褐色顆粒為陽性，采用圖像分析技術進行相對定量分析，以平均光密度(mean optical density,MOD)值表示免疫染色結果。原位分子雜交結果以細胞質和/或細胞核出現明顯黃色

4、或黃褐色顆粒為陽性染色，計數每高倍視野肝間質內陽性細胞數。 結果： (1)感染后6wk，匯管區(qū)可見大量嗜酸性粒細胞和淋巴細胞浸潤，亦可見一定數量的單核細胞浸潤。肝內病變主要是散在分布于匯管區(qū)的急性蟲卵結節(jié)，部分匯管區(qū)見蟲卵聚集成簇，蟲卵結節(jié)周圍可見少量膠原纖維。AST兩個劑量組病理形態(tài)學改變與模型組差異無顯著性(P>0.05)；10wk和14wk末，血吸蟲肝病的主要表現為慢性蟲卵結節(jié)和纖維化結節(jié)，蟲卵周圍主要為梭形的成纖維細胞

5、和膠原纖維包繞，可見膠原纖維沿匯管區(qū)延伸并相互連接，部分肝細胞間亦可見少量膠原纖維。AST兩個劑量組蟲卵結節(jié)面積及纖維化程度較模型組明顯降低(P<0.01，P<0.05)。 　　(2)ESM.1 mRNA及蛋白在正常小鼠肝組織中僅血管內皮細胞和部分肝細胞有較弱陽性反應，主要定位于細胞質。 (3)血吸蟲肝病組織中，ESM-1蛋白免疫染色定位于細胞質，主要分布在蟲卵結節(jié)和肝間質的各種炎細胞(單核細胞、粒細胞及淋巴細胞)、成纖維細

6、胞、血管內皮細胞、膽管上皮細胞和肝細胞。 (4)血吸蟲肝病組織中，ESM-1 mRNA在細胞中定位于細胞質和/或細胞核，在組織中主要分布在蟲卵結節(jié)和肝間質，在炎細胞(單核細胞、粒細胞及淋巴細胞)、膽管上皮細胞、血管內皮細胞和肝細胞表達，成纖維細胞未檢測出ESM-1 mRNA。 (5)血吸蟲肝病組織中(模型組)，ESM-1蛋白的MOD值均高于相應的正常對照組，10wk及14wk時較6wk時顯著增高(P<0.01)，但10

7、wk和14wk間比較差異無顯著性(P>0.05)；6wk時AST高、低劑量組和模型組之間ESM-1蛋白水平差異無顯著性(P>0.05)，10wk和14wk時ASI'兩個劑量組ESM-1的蛋白水平低于模型組(.P<0.01)；10wk時AST高、低劑量組ESM-1 mRNA陽性細胞計數低于模型組(P<0.01)。 結論：小鼠血吸蟲病肝組織中，炎細胞可能是產生ESM-1的主要細胞之一，成纖維細胞可能存在ESM.1受體。推測ESM.