日本血吸蟲SEA和SMWA抗原免疫后小鼠PD-1-PDL的表達.pdf

1、免疫系統的功能是免疫防御、免疫自穩(wěn)和免疫監(jiān)視。機體抵抗病原體感染的免疫機制包括非特異性免疫與特異性免疫，針對病原體感染產生免疫應答的主要目的是清除病原體。免疫應答包括抗原識別、免疫細胞的活化和分化、效應分子（體液免疫）和效應細胞（細胞免疫）對病原體的清除作用以及對免疫應答的調節(jié)。一般隨著病原體的清除后免疫應答隨之結束。但病原體感染會對機體免疫功能產生多方面的影響：既刺激機體產生免疫應答，也可以使機體免疫功能降低，導致感染進入慢性期。免疫

2、抑制主要表現為T細胞產生特異性抗體能力降低，體內、外細胞免疫或遲發(fā)型超敏反應減弱,特定的淋巴細胞亞群數量的減少和一定程度的功能抑制。 免疫抑制的形成與細胞間相互作用產生負性的傳遞信號有著密切的關系。這些信號限制、終止和/或減弱T細胞應答，改變這些協同刺激因子的表達可以調控免疫的強度和方向。到目前為止已發(fā)現毒性T淋巴細胞相關抗原-4（Cytotoxic T lymphocyte associated antigen-4，CTLA-

3、4）、B/T淋巴細胞間抑制信號（B and T lymphocyte attenuator，BTLA）、程序性死亡-1（Programmed death 1，PD-1）等B7-CD28家族的蛋白分子以及調節(jié)性T細胞（Regulatory T cells，Treg）和細胞因子（如白細胞介素-10）等與免疫負調節(jié)有關。它們發(fā)揮免疫自穩(wěn)的作用，避免過度免疫應答形成病理損傷和自身免疫病。其中，PD-1是B7家族的第2個抑制性受體，其兩個配體分別

4、為PD-L1和PD-L2，PD-1與其配體結合以后向胞內傳導負性信號，成為免疫抑制中的重要傳導通路。PD-L1和PD-L2的表達與細胞因子的分泌相關，其中Th1類的細胞因子如IFN-γ可顯著刺激PD-L1的表達上調，而Th2類的細胞因子如IL-4則使PD-L2表達上調。 寄生蟲感染可導致宿主的免疫功能受到抑制，例如弓形蟲的感染誘導CTLA-4的釋放；馬來絲蟲可抑制T細胞的增生；非洲錐蟲感染后小鼠體內巨噬細胞抗原遞呈功能缺陷。近年

5、來在淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒、HIV、HCV等病毒感染和幽門螺旋桿菌、墨西哥利什曼原蟲等細菌或原蟲感染的研究中發(fā)現，免疫抑制的形成與PD-1及其配體的高表達密切相關，在曼氏血吸蟲感染中也發(fā)現了PD-1及其配體的表達升高。日本血吸蟲感染亦會造成宿主的免疫功能抑制，其機制是否與PD-1以及配體有關則未見相關報道。本文旨在觀察和探討日本血吸蟲不同期抗原免疫后PD-1及其配體PD-L1、PD-L2的表達，以及與相關細胞因子分泌之間的關系。

6、 分別用日本血吸蟲可溶性蟲卵抗原（Soluble egg antigen，SEA）和可溶性雄蟲抗原（Soluble male worm antigen，SMWA）腹部皮下多點注射免疫BALB/c小鼠，劑量均為50μg/次，免疫4次，每次間隔1周。正常對照組用PBS代替抗原。末次免疫后4周收集脾細胞，流式細胞術觀察小鼠脾淋巴細胞表面PD-1的表達及脾樹突狀細胞表面配體PD-L1和PD-L2的表達；將脾細胞在體外短暫培養(yǎng)后，5μg/ml

7、ConA刺激,收集上清，夾心ELISA法檢測細胞因子IFN-γ和IL-4的表達。結果顯示，血吸蟲抗原免疫后淋巴細胞上PD-1的表達顯著增高，且蟲卵抗原免疫后的PD-1的表達高于雄蟲抗原免疫，差異具有顯著性；在樹突狀細胞上PD-L1和PD-L2的表達也較對照組顯著上升，蟲卵抗原免疫后的PD-L2的表達高于雄蟲抗原免疫，而雄蟲抗原免疫后的PD-L1的表達高于蟲卵抗原免疫，差異具有顯著性。ELISA檢測脾細胞培養(yǎng)上清發(fā)現，兩種抗原免疫后脾細胞

8、分泌的IFN-γ和IL-4均升高，其中雄蟲抗原免疫后IFN-γ的升高較IL-4更為明顯；而蟲卵抗原免疫后IL-4的分泌增加則較IFN-γ更明顯，說明PD-L1的高表達與日本血吸蟲的雄蟲抗原免疫后產生的IFN-γ有關，而PD-L2的高表達則與日本血吸蟲的蟲卵抗原免疫后產生的IL-4有關。 本研究首次報道了日本血吸蟲抗原免疫促進了PD-1及其配體的表達，而且雄蟲抗原免疫后脾樹突狀細胞PD-L1的表達與IFN-γ的分泌有關，而蟲卵抗原