Leber視神經(jīng)萎縮(LHON)家系線粒體DNA突變的分析.pdf

1、研究目的：對我國的一個(gè)LHON家系的線粒體基因組全序列進(jìn)行測序分析，探討其致病的分子基礎(chǔ)。
　　 研究對象：一個(gè)包括11例患者的6代LHON家系，其中5個(gè)患者和4個(gè)表型正常的家系成員納入研究，另外，50例無任何親緣關(guān)系的正常健康人作對照。研究方法：(1)抽取患者和正常健康對照的外周血(抗凝)；(2)利用WizardGenomicDNAPurification試劑盒從外周血中提取和純化基因組DNA；(3)應(yīng)用等位基因特異性多重PC

2、R(MAS-PCR)方法體系排查3個(gè)原發(fā)性LHON突變位點(diǎn)；(4)利用兩套PCR體系擴(kuò)增線粒體DNA(mtDNA)全序列，進(jìn)行DNA測序分析并與最新劍橋標(biāo)準(zhǔn)mtDNA序列比對。
　　 研究結(jié)果：該LHON家系未發(fā)現(xiàn)3個(gè)LHON原發(fā)性突變位點(diǎn)(G3460A，G11778A和T14484C)，mtDNA全序列分析結(jié)果顯示該家系一個(gè)罕見的原發(fā)突變C4171突變及29個(gè)其他位點(diǎn)變異.其中多態(tài)性位點(diǎn)150T，5231A，12358G，12

3、372A，16257A，16261T，16129A，4386C，12007A，和16111T確定為東亞單倍型N9a1。原發(fā)突變C4171A使得ND1基因的289個(gè)密碼子由高度保守的亮氨酸變成了蛋氨酸。29個(gè)其他位點(diǎn)變異中包括27個(gè)為多態(tài)性(SNP)，一個(gè)新的突變位點(diǎn)A14841G和一個(gè)已發(fā)現(xiàn)的A15095G。A14841G突變導(dǎo)致細(xì)胞色素b(Cytb)蛋白32位置上高度保守的天門冬氨酸變?yōu)榻z氨酸，推測該突變位點(diǎn)可能與C4171A突變在L