線粒體tRNAThr15927G＞A突變與Leber遺傳性視神經(jīng)病變的相關(guān)性研究.pdf

1、溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文論文題目： 緝揎佳型△三竺：里量2 2 Z Q 三△塞變量L 業(yè)皇￡塑佳絲塑挫經(jīng)痘鑾數(shù)擔(dān)差絲班塞論文答辯日期： 2 Q ! 魚生Q 墨目2 Q 呈溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文線粒體t R N A n r 15 9 2 7 G > A 突變與L e b e r 遺傳性視神經(jīng)病變的相關(guān)性研究中文摘要L e b e r 遺傳性視神經(jīng)病變( L e b e r ’s h e r e d i t a r yo p t i

2、 cn e u r o p a t h y ，L H O N ) 是一種典型的母系遺傳病，導(dǎo)致急性、或亞急性無痛性雙側(cè)視力損傷。作為細(xì)胞內(nèi)最重要的細(xì)胞器之一的線粒體，在與L H O N 發(fā)生相關(guān)的A T P ( a d e n o s i n et r i p h o s p h a t a s e ) 、視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞退行性變等重要過程中起著關(guān)鍵的作用。為了研究線粒體t R N A 基因突變是否參與了L H O N 的發(fā)生，本研究對(duì)

3、中國人群中L H O N 患者進(jìn)行了大規(guī)模的線粒體全基因組測(cè)序篩查，發(fā)現(xiàn)了共5 例具有母系遺傳特性的攜帶線粒體t R N A T M1 5 9 2 7 G > A 突變的漢族L H O N 家系，分別是W Z 7 2 8 、W Z l 0 9 9 、W Z l 1 0 0 、W Z I 1 0 7 、W Z l 2 1 4 。本研究對(duì)這5 例L H O N 家系的臨床表現(xiàn)、遺傳學(xué)、分子生物學(xué)進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)5 例家系中先證者發(fā)病年

4、齡分別為1 7 、1 0 、3 4 、2 8 、2 4 歲，平均發(fā)病年齡為2 0 ．6 歲，視力損傷程度也各不相同，從輕度到重度，其家系成員患病外顯率分別為2 8 ．6 ％、1 6 ．7 ％、1 4 ．3 ％、6 ．7 ％、1 0 ．O ％，平均外顯率為1 5 ．3 ％。對(duì)5 例家系成員進(jìn)行線粒體全基因組測(cè)序發(fā)現(xiàn)，母系成員單體型分屬于東亞單體型B 5 b 2 、M 、z 、B 5 b 2 、F l c ，并且他們都存在線粒體t R N

5、A T M1 5 9 2 7 G > A 突變。1 5 9 2 7 位點(diǎn)位于線粒體t R N A T M 的4 2 位點(diǎn)，此位點(diǎn)在進(jìn)化中高度保守，該位點(diǎn)突變破壞了線粒體t R N A r r u - 反密碼子臂上高度保守的2 8 C ．4 2 G 堿基對(duì)，影響t R N A 的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性。本研究采集W Z l 0 0 9 ．I I I ．1 外周血并建立了永生化淋巴母細(xì)胞系以及成功構(gòu)建了胞質(zhì)雜合體。N o r t h e r n

6、B l o t 印記雜交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明攜帶線粒體t R N A T M1 5 9 2 7 G > A 突變的細(xì)胞線粒體t R N A T M 穩(wěn)態(tài)水平下降。線粒體t R N A T M 代謝的紊亂導(dǎo)致線粒體氧化呼吸鏈復(fù)合體損傷，并影響氧化呼吸效率。其中復(fù)合體I 及復(fù)合體I I I 酶活力分別下降了6 6 ．3 ％( P - - 0 ．0 4 0 4 ) 、4 2 ．7 ％( P = - 0 ．0 1 5 1 ) ，具有顯著性差異。突

7、變組細(xì)胞線粒體蛋白質(zhì)合成下降，其中N D l 下降約6 6 ．4 ％( P = 0 ．0 0 2 2 ) 、N D 5 下降約5 2 ．8 ％( P = 0 ．0 0 4 0 ) 、C t v B 下降約4 0 ．9 ％( P = 0 ．0 3 8 0 ) ，具有顯著性差異。此外突變組細(xì)胞的線粒體產(chǎn)生的A T P 比正常對(duì)照組細(xì)胞的線粒體產(chǎn)生的A T P 平均降低了4 1 ．0 ％。綜上所述，本研究對(duì)線粒體t R N A T M1 5