中國人Leber遺傳性視神經(jīng)病變的分子遺傳學(xué)和臨床研究.pdf

1、第一章 中國人Leber遺傳性視神經(jīng)病變一特殊家系的分子遺傳學(xué)研究 目的： 對中國漢族一缺乏三個主要原發(fā)突變位點的Leber遺傳性視神經(jīng)病變(Leberhereditaryopticneuropathy，LHON)家系成員，進行全線粒體基因掃描，尋找可能的與疾病相關(guān)的線粒體基因突變位點。 方法： 中國人LHON一家系三代共14位母系成員接受全面的眼科臨床檢查，包括：視力、眼底檢查與照相、視野、視網(wǎng)

2、膜神經(jīng)纖維層厚度分析及視覺誘發(fā)電位檢查；常規(guī)苯酚氯仿法提取外周血DNA，針對線粒體基因全序設(shè)計的24對引物進行PCR擴增，純化產(chǎn)物由ABI3700進行測序，與健康對照者線粒體基因全序及最新劍橋標(biāo)準(zhǔn)序列進行比對，分析可能的與疾病相關(guān)的線粒體基因突變位點。 結(jié)果：該家系表現(xiàn)為一典型的母系遺傳病，患者無痛性視力下降和視神經(jīng)萎縮的臨床表現(xiàn)符合LHON診斷。全線粒體基因測序未發(fā)現(xiàn)三個主要原發(fā)突變位點，但發(fā)現(xiàn)存在以下線粒體基因突變：T421

3、6C/ND1基因、A13651G/ND5基因和A15951G/tRNAThr基因。進一步分析表明，該家系屬于亞洲人群的HaplogroupD4b1亞型。其中，T4216C突變是已報道LHON的繼發(fā)突變之一，多協(xié)同LHON主要的原發(fā)突變G11778A而致病，同時又是決定歐洲人群HaplogroupJ亞型的主要多態(tài)性位點；線粒體NDs基因的A13651G突變，是決定亞洲人群HaplogroupD4a的主要多態(tài)位點，突變導(dǎo)致中度保守的色氨酸突

4、變?yōu)楸彼?，跨膜蛋白疏水性的改變，由此可能影響呼吸鏈?fù)合體I的電子傳遞，從而影響線粒體的氧化磷酸化；tRNAThr基因突變A15951G已報道具有協(xié)同原發(fā)突變G11778A對LHON的致病作用。 結(jié)論： 本文首次報道了繼發(fā)突變T4216C獨立于原發(fā)突變在亞洲人群HaplogroupD4b1亞型的中國LHON家系中，也是T4216C與A13651G突變共同存在于亞洲人群HaplogroupD4b1亞型的首次報道。其與A15

5、951G的協(xié)同作用可能在該中國人LHON家系的發(fā)病機制中具有一定的作用。但該LHON家系缺乏主要的原發(fā)突變位點，進一步提示除了線粒體基因突變外，核基因也可能與LHON的發(fā)病相關(guān)。 第二章G11778A突變型Leber遺傳性視神經(jīng)病變患者血清總SOD活力和MDA含量的研究 目的： 通過檢測G11778A突變型Leber遺傳性視神經(jīng)病變(LHON)患者血清總超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，了解LH

6、ON患者體內(nèi)氧化-抗氧化狀態(tài)。 方法： 本研究為病例-對照研究，納入了經(jīng)眼科檢查和線粒體基因測序確診的G11778A突變型LHON患者19例、攜帶者12例，以及正常對照者30例，分別應(yīng)用黃嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法檢測受試者血清總SOD活力和MDA含量。 結(jié)果： LHON患者血清總SOD活力較攜帶者和正常對照者均明顯下降(q分別為7.085、8.351，均P<0.05)，攜帶者與正常對照者的血清總SOD

7、活力差異無統(tǒng)計學(xué)意義(q=0.269，P>0.05)。LHON患者和攜帶者的血清MDA含量均明顯高于正常對照者(q分別為9.069、4.748，均P<0.05)，LHON患者的血清MDA含量也高于攜帶者(q=3.618，P<0.05)。 結(jié)論： LHON患者體內(nèi)抗氧化能力明顯下降，機體氧化-抗氧化系統(tǒng)失衡與LHON的發(fā)病有關(guān)。 第三章StratusOCT在Leber遺傳性視神經(jīng)病變視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層厚度分析中的應(yīng)用

8、 目的： 應(yīng)用StratusOCT測量Leber遺傳性視神經(jīng)病變(LHON)患者和攜帶者的視網(wǎng)膜神經(jīng)纖維層(Retinalnervefiberlayer,RNFL)厚度，以了解LHON患者和攜帶者的RNFL厚度特點和變化規(guī)律。 方法： 本研究納入了經(jīng)臨床和線粒體全基因掃描確診的G11778A突變型LHON母系家庭成員21例(41眼)，正常對照者136例(209眼)。根據(jù)病史和視功能檢查，將LHON家系成員

9、初步劃分為攜帶者和LHON患者；根據(jù)其眼底表現(xiàn)，進一步劃分為正常攜帶者、臨床前期者、早期、進展期和晚期患者。所有受試者均接受了StratusOCT檢查，采用的檢查程序是以視盤為中心直徑3.4mm的快速RNFL厚度測量程序。 結(jié)果： 眼底表現(xiàn)正常的LHON攜帶者的RNFL厚度與正常對照者相比無明顯差異；臨床前期者和LHON早期患者的顳側(cè)、上方、下方RNFL厚度，以及360°平均RNFL厚度均較正常對照者增厚；進展期患者RN

10、FL表現(xiàn)為僅顳側(cè)變?。煌砥诨颊逺NFL則表現(xiàn)為所有象限均明顯變薄。 結(jié)論： 應(yīng)用StratusOCT測量RNFL厚度，有助于了解LHON攜帶者和患者的RNFL厚度特點和變化規(guī)律，能夠客觀反映LHON疾病發(fā)生發(fā)展過程中RNFL的改變。將LHON病程分為早期、進展期和晚期的臨床分期法，能夠更準(zhǔn)確地反映LHON的自然病程，并與其眼底改變相符合。對處于臨床前期者的隨訪有可能發(fā)現(xiàn)LHON發(fā)病的扳機點，以利于將來可能開展的早期干預(yù)和