神經(jīng)系統(tǒng)線粒體疾病線粒體DNA突變篩查及分析.pdf

1、本課題通過(guò)篩查北京協(xié)和醫(yī)院5年內(nèi)確診及疑似線粒體疾病患者的多個(gè)突變位點(diǎn)并分析其臨床特點(diǎn)，探討mtDNA基因型與臨床表型間的關(guān)系。 方法：根據(jù)國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道，選取與臨床常見(jiàn)疾病相關(guān)的流行率較高的mtDNA熱點(diǎn)突變A3243G、T3271C、A3302G、A8344G、T8356c、T8993C和T8993G，用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性酶切片段長(zhǎng)度多態(tài)性(polymerase chain reacton-restriction fra

2、gment lengthp01ymorphism，PCR-RFLP)分析和聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-DNA測(cè)序(PCR-測(cè)序)的方法進(jìn)行患者外周血mtDNA檢測(cè)；分析突變陽(yáng)性患者的臨床特點(diǎn)，探討陽(yáng)性突變基因型與臨床表型之間的關(guān)系。 結(jié)果： 一、63例臨床確診及疑似線粒體疾病的患者中檢測(cè)到A3243G陽(yáng)性患者3例，占線粒體腦肌病伴乳酸血癥和卒中樣發(fā)作綜合征(mitochondrial encephalomyopathy，lactic

3、 acidosis，stroke-like episodes syndrome，MELAS)患者的33.33％(95％CI：7％-70％)，占全部臨床確診或疑似線粒體疾病患者的4.76％(95％CI：0-10.02％)。 二、其余的熱點(diǎn)突變(T3271C、A3302G、A8344G、T8356C、T8993G、T8993C)未發(fā)現(xiàn)有陽(yáng)性患者。 三、A3243G陽(yáng)性患者的母親外周血中均未檢測(cè)出A3243G突變。 四

4、、在非突變熱點(diǎn)處檢測(cè)到同質(zhì)性的堿基替換C3206T、G3316A、T3394C和T3396C各一例；發(fā)現(xiàn)未見(jiàn)報(bào)道的異質(zhì)性堿基替換A3304T一例，同質(zhì)性堿基替換T3398C、T8288C和T3345C各一例，同質(zhì)性插入重復(fù)3168insG一例。非突變熱點(diǎn)處mtDNA改變總頻率為14.29％(95％CI：5.64％-22.93％)。本研究中患者mtDNA發(fā)生改變的總頻率為19.05％(95％CI：14.35％-23.75％)。 五

5、、本研究的患者中mtDNA單倍型B占18.33％(95％CI：8.54％-28.12％)，與普通中國(guó)人群無(wú)顯著性差異。 結(jié)論： 一、A3243G突變率及其異質(zhì)性與肌病、腦病表型的關(guān)系與既往報(bào)道大致相符。對(duì)臨床疑似線粒體疾病的患者首先考慮篩查A3243G突變及其他熱點(diǎn)突變，可為患者減少大量非必要臨床檢查及非針對(duì)性治療。 二、新發(fā)現(xiàn)的異質(zhì)性堿基替換A3304T和同質(zhì)性插入重復(fù)3168insG可能是與線粒體疾病相關(guān)的新

6、突變；不能排除同質(zhì)性堿基替換G3316A和T3394C與線粒體腦肌病、T3398C與慢性進(jìn)行性眼外肌麻痹(chronic progressive external ophthalmoplegia，CPEO)相關(guān)。本研究中除檢測(cè)到熱點(diǎn)突變(陽(yáng)性率4.76％，95％CI：0-10.02％)外還在非突變熱點(diǎn)處檢測(cè)到多種可能有致病性的mtDNh改變(頻率為7.94％，95％CI：1.27％-14.61％)，提示對(duì)熱點(diǎn)突變陰性的線粒體疾病患者進(jìn)行