Syncytin在小鼠失神經(jīng)支配腓腸肌中的表達.pdf

1、背景與目的：運動神經(jīng)元病(motorneurondisease，MND)是一組病因未明的慢性進行性神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病。運動神經(jīng)元病包括肌萎縮側(cè)索硬化、進行性脊肌萎縮癥、原發(fā)性側(cè)索硬化和進行性延髓麻痹。其中肌萎縮側(cè)索硬化(amyotrophiclateralsclerosis，ALS)是最常見的運動神經(jīng)元疾病，大約10％ALS病人為家族型，呈常染色體顯性遺傳。大約90％為散發(fā)型ALS，散發(fā)型ALS的發(fā)病機理不清。過氧化損傷、谷氨酸的興奮毒性

2、作用、線粒體功能障礙、蛋白錯誤折疊、神經(jīng)細絲的解體和軸突轉(zhuǎn)運障礙、病毒感染機制、中毒機制、自身免疫、環(huán)境因素等可能參與ALS的發(fā)病。流行病學(xué)研究目前提出了環(huán)境因素和基因易感性聯(lián)合導(dǎo)致ALS的假說，其中病毒感染是一個重要的因素。
　　雖然在臨床上有證據(jù)表明ALS與脊髓灰質(zhì)炎病毒、腸道病毒及逆轉(zhuǎn)錄病毒存在相關(guān)性，但是至今仍未能成功地鑒定出一種明確的ALS致病性病毒。近年來報道了ALS病人及與病人有血緣關(guān)系的健康對照組血清中存在與外源性

3、逆轉(zhuǎn)錄病毒RNA均無同源性的逆轉(zhuǎn)錄病毒逆轉(zhuǎn)錄酶RNA的表達，推測出ALS患者逆轉(zhuǎn)錄酶活性增高可能是源于激活的人基因組上的內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒(Humanendogenousretroviruses，HERVs)。
　　Oluwole等應(yīng)用實時PCR檢測了MND患者萎縮肌肉、未萎縮肌肉以及正常對照組肌肉組織中位于染色體7q21.2的HERV-Wenv即syncytin基因的表達，結(jié)果顯示萎縮肌肉組織中syncytinmRNA水平比正常對

4、照肌肉組織顯著增高，比未萎縮肌肉組織也有增高。此研究在國際上首次報道了MND組織中syncytin基因的異常轉(zhuǎn)錄，但其與MND可能的相關(guān)性及意義仍待進一步研究。
　　張偉等采用小鼠坐骨神經(jīng)橫斷損傷模型，應(yīng)用realtimePCR檢測神經(jīng)損傷后7天腓腸肌中syncytinmRNA水平，與對照組間沒有顯著差異。為了消除手術(shù)創(chuàng)傷和神經(jīng)損傷后急性炎癥的影響，本研究采用小鼠坐骨神經(jīng)橫斷損傷模型，延長觀察時間，檢測坐骨神經(jīng)損傷后14天失神經(jīng)支

5、配的腓腸肌中syncytin的表達及定位，探討骨骼肌中syncytin的表達是否與失神經(jīng)支配相關(guān)。
　　材料和方法：昆明鼠30只，隨機分為手術(shù)組+自身對照組、假手術(shù)組、正常組，每組10只，制備左側(cè)坐骨神經(jīng)橫斷損傷動物模型。
　　方法：1、術(shù)前及術(shù)后1、5、9、13天測量小鼠雙下肢行走兩側(cè)足間距距離。
　　2、術(shù)后第14天，取材小鼠腓腸肌肌肉樣本，手術(shù)組動物分別取材左側(cè)(手術(shù)側(cè))腓腸肌和右側(cè)腓腸肌，右側(cè)腓腸肌作為自身對照

6、組，假手術(shù)組動物取材左側(cè)(假手術(shù)側(cè))腓腸肌，正常對照組取材左側(cè)腓腸肌。每個腓腸肌標本平均分為三份，分別提取總RNA、總蛋白和進行免疫熒光染色。
　　3、應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR檢測腓腸肌中syncytinmRNA的水平，以β-actinmRNA水平為內(nèi)參。
　　4、應(yīng)用western-blot檢測腓腸肌中syncytin蛋白的水平，以GAPDH蛋白水平為內(nèi)參。
　　5、腓腸肌進行石蠟包埋、切片，應(yīng)用熒光免疫組化的方

7、法檢測syncytin在骨骼肌中的表達部位。
　　實驗結(jié)果：1、術(shù)前與術(shù)后第1天，手術(shù)組、假手術(shù)組小鼠兩側(cè)足趾間距無顯著差異(均P>0.05)。術(shù)后5、9、13天，手術(shù)組小鼠兩側(cè)足趾間距比假手術(shù)組小鼠顯著縮短(均P<0.05)。
　　2、術(shù)后14天，手術(shù)組小鼠手術(shù)側(cè)腓腸肌syncytinmRNA水平比手術(shù)組自身對照組、假手術(shù)組、正常組腓腸肌syncytinmRNA水平顯著增高(均P<0.05)。
　　3、術(shù)后14天，手

8、術(shù)組小鼠手術(shù)側(cè)腓腸肌syncytin蛋白水平比手術(shù)組自身對照組、假手術(shù)組、正常組腓腸肌syncytin蛋白水平顯著增高(均P<0.05)。
　　4、腓腸肌石蠟切片免疫熒光染色可見syncytin位于骨骼肌細胞膜。
　　結(jié)論：坐骨神經(jīng)橫斷損傷后，小鼠運動功能明顯受損。坐骨神經(jīng)損傷后14天在失神經(jīng)支配的腓腸肌中內(nèi)源性逆轉(zhuǎn)錄病毒膜蛋白syncytinmRNA及蛋白水平顯著增高。免疫熒光組化染色顯示syncytin在骨骼肌細胞膜陽性