肺表面活性物質(zhì)蛋白B基因多態(tài)性與早產(chǎn)兒肺部疾病易感性的關(guān)系初探.pdf

1、第一部分
　　 目的：了解肺表面活性物質(zhì)蛋白B（SPB）基因多態(tài)性與新生兒呼吸窘迫綜合征易感性的關(guān)系。
　　 方法：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)（PCR-RFLP）分析技術(shù)及基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)2008-2010年91 名新生兒呼吸窘迫綜合征患兒并與182 名同胎齡兒比較，觀察兩組之間肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18 及1580 多態(tài)性位點(diǎn)基因型和等位基因分布的差異。并比較武漢漢族人與不同種族人之間這兩個(gè)位點(diǎn)基因分布差異。

2、
　　 結(jié)果：
　　 ①肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18A/C 多態(tài)性位點(diǎn)在NRDS組和對(duì)照組中AA,AC,CC的基因型頻率分別為10.9％，40.6％，48.4％，和 6.6％，31.1％,62.1％,兩組基因型分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異，但A等位基因頻率在NRDS組高于對(duì)照組31.3％vs22.3％。
　　 ②肺表面活性物質(zhì)蛋白B 1580C/T 多態(tài)性位點(diǎn)在NRDS組和對(duì)照組中TT,TC,CC3 種基因型頻率分別為5.5

3、％，30.8％％，63.7％，和6.6％，45.1％,48.4％,兩組基因型分布沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異，但C等位基因頻率在NRDS組高于對(duì)照組。
　　 ③武漢漢族人與美國(guó)人、巴西人、丹麥人比較，肺表面活性物質(zhì)蛋白B 1580C/T等位基因的分布比例分別為74％VS26％;35％VS65％；41％VS57％；46％VS54％。P 均小于0.05，日本人為72％VS28％,與武漢漢族人比較P 大于0.05。武漢漢族人與巴西人、美國(guó)人、丹麥

4、人比較，肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18A/C等位基因比例為25％VS75％;58％VS42％;57％VS43％;61％VS39％.P 均小于0.05。
　　 結(jié)論：中國(guó)武漢漢族人中肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18A/C 及1580C/T基因多態(tài)性與新生兒呼吸窘迫綜合征的易感性相關(guān)。A等位基因和C等位基因分別是這兩個(gè)位點(diǎn)的易感基因。不同種族間在SPB1580和-18基因多態(tài)性分布方面有明顯差異。
　　 第二部分
　　 目的：

5、了解肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18A/C和1580C/T基因多態(tài)性與支氣管肺發(fā)育不良易感性的關(guān)系.
　　 方法：應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)（PCR-RFLP）分析技術(shù)及基因測(cè)序技術(shù)檢測(cè)2007-2010年57 名支氣管肺發(fā)育不良患兒及117 名對(duì)照組同胎齡兒童的SPB-18 及1580基因多態(tài)性，比較兩組之間SPB-18 及1580基因型和基因分布的差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、BPD組與對(duì)照組中肺表面活

6、性物質(zhì)蛋白B-18A/C 多態(tài)性位點(diǎn)AA、AC、CC基因型頻率分別為14％、45.6％、40.4％和4.9％、31.1％、64.1％；兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，回歸分析顯示：A等位基因增加新生兒患BPD的風(fēng)險(xiǎn)為：AC/CC與AA/CC的OR 值分別為2.3（95％置信區(qū)間為1.2-4.7）和4.7（95％置信區(qū)間為1.4-16.2），P 值分別0.02和0.01。
　　 2、肺表面活性物質(zhì)蛋白B1580C/T 多態(tài)性位點(diǎn)TT,CT

7、,TT基因型在對(duì)照組和BPD組分布分別為6.8％、45.6％、47.6％和12.3％、40.4％、47.4％，對(duì)照組和BPD組間沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：中國(guó)武漢漢族人中肺表面活性物質(zhì)蛋白BB-18基因多態(tài)性是支氣管肺發(fā)育不良的危險(xiǎn)因素，基因型為AA 者是BPD 易感人群。肺表面活性物質(zhì)蛋白B1580 C/T基因多態(tài)性與支氣管肺發(fā)育不良發(fā)病沒(méi)有明顯相關(guān)性。
　　 第三部分
　　 目的：探索高分辨率熔解曲線(H

8、RM)分析技術(shù)在檢測(cè)肺表面活性物質(zhì)蛋白B (SPB)-18基因多態(tài)性中的應(yīng)用。
　　 方法：利用高分辨率熔解曲線分析技術(shù)檢測(cè)SPB-18基因多態(tài)性位點(diǎn)，并以基因測(cè)序這一金標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)其結(jié)果的可靠性。
　　 結(jié)果：應(yīng)用高分辨率熔解曲線分析肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18 位點(diǎn)基因多態(tài)性分型結(jié)果顯示，80例樣品中有3 種類型熔解曲線，A 型42例，B 型33例，C 型5例。測(cè)序結(jié)果顯示，SPB-18 A 型熔解曲線代表其基因型為CC，

9、B 型熔解曲線代表基因型CA，C 型熔解曲線代表基因型為AA，高分辨率熔解曲線分析技術(shù)分析結(jié)果與基因測(cè)序結(jié)果完全一致。
　　 結(jié)論：本研究表明高分辨率熔解曲線分析技術(shù)分析技術(shù)能準(zhǔn)確檢測(cè)肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18基因多態(tài)性，是一種適合大規(guī)模篩查SPB-18 多態(tài)性的方法。
　　 第四部分
　　 目的：了解肺表面活性物質(zhì)蛋白B（SPB）-18基因多態(tài)性與新生兒呼吸窘迫綜合征（NRDS）易感性的關(guān)系及其機(jī)制。
　

10、　 方法：
　　 1、應(yīng)用高分辨率溶解曲線法(HRM)和基因測(cè)序法檢測(cè)2009年5月-2010年12月100 名新生兒呼吸窘迫綜合征患兒及186 名同胎齡兒肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18 多態(tài)性位點(diǎn)基因型和等位基因的差異。
　　 2、應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)2009年5月-2010年12月29例基因型為SPB-18CA和32例SPB-18CC的足月新生兒支氣管肺泡灌洗液中SPB 水平，比較兩組之間差異.

11、　　 結(jié)果：
　　 1、肺表面活性物質(zhì)蛋白B-18A/C 多態(tài)性位點(diǎn)在NRDS組和對(duì)照組中AA,AC,CC的基因型頻率分別為11.％，40％，49％，和 6.5％，31.7％,61.8％,兩組基因型分布無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異；但等位基因A 頻率在NDRS組和對(duì)照組間分別為31％和22.3％，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 2、基因型為SPB-18CA 者比CC 者支氣管肺泡灌洗液中SPB 蛋白水平低。其濃度分別是2824±486ng/m