重要炎癥介質(zhì)基因多態(tài)性與自發(fā)性早產(chǎn)遺傳易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、早產(chǎn)(Preterm Birth，PTB)是指在妊娠不滿37周的分娩，是導(dǎo)致新生兒發(fā)病和死亡的重要原因，同時也是導(dǎo)致嬰幼兒發(fā)生諸如腦癱、發(fā)育遲緩、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變、慢性肺部疾病以及聽覺和視覺障礙等并發(fā)癥和后遺癥的重要因素。PTB可分為自發(fā)性早產(chǎn)(Spontaneous Preterm Birth，SPTB)和治療性PTB(Therapeutic PretermBirth，TPTB)兩種。約70％的PTB為SPTB，SPTB中有50％是胎

2、膜早破（PrematureRupture of Membranes，PROM）導(dǎo)致的，又稱為早產(chǎn)胎膜早破(Preterm Rupture ofMembranes，PPROM)。流行病學(xué)研究表明SPTB具有家族聚集現(xiàn)象、明顯的種族差異性以及復(fù)發(fā)性;關(guān)聯(lián)研究也顯示許多與感染、炎癥和先天免疫反應(yīng)相關(guān)的基因多態(tài)性是SPTB發(fā)生的危險因素，可見遺傳因素在SPTB的發(fā)生機制中具有重要作用。SPTB的病因和發(fā)病機制仍不十分明確，研究表明，宮內(nèi)感染和炎

3、癥性反應(yīng)是導(dǎo)致SPTB及PPROM的重要原因。而且，不論是否有感染發(fā)生，SPTB及PPROM都與調(diào)節(jié)炎癥和免疫反應(yīng)的炎癥細胞因子、趨化因子、金屬蛋白酶等炎癥介質(zhì)的變化密切相關(guān)。炎癥介質(zhì)基因單核苷酸多態(tài)性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）可以影響SPTB及PPROM發(fā)生的風(fēng)險，是研究其遺傳易感性很好的候選基因。目前，一些關(guān)于炎癥介質(zhì)基因的SNPs與SPTB遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性研究普遍存在樣本數(shù)量小、

4、未校正混雜因素、結(jié)果不一致等問題。而且，由于基因的SNPs存在顯著的種族差異性，國外人群中遺傳易感性的研究結(jié)果也不一定適用于中國人群。因此，有必要在中國人群中進行大樣本系統(tǒng)的SPTB遺傳易感性的研究工作，鑒別出與SPTB的發(fā)生密切相關(guān)的易感基因和SNP，對于揭示PTB的發(fā)病機理、進行早期預(yù)防和干預(yù)都具有重要意義。
　　目的:
　　研究單核細胞趨化因子-1(Monocyte chemoattractant protein，MC

5、P-1)、調(diào)節(jié)活化正常T細胞表達和分泌的趨化因子(Regulated on activation normal T cellexpressed and secreted，RANTES)、腫瘤壞死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α)、白細胞介素-15(Interleukin-15，IL-15)、白細胞介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、基質(zhì)金屬蛋白酶-8（Matrix metallop

6、roteinases，MMP-8）這些重要炎癥介質(zhì)基因的SNPs與SPTB遺傳易感性的關(guān)聯(lián)性。以獲得具有應(yīng)用價值的易感基因和SNP，為高風(fēng)險人群的鑒定、PTB的預(yù)防以及將來可能的個性化基因治療提供新的生物學(xué)標記。
　　方法:
　　采用基于候選基因的病例-對照研究，病例組包括753例SPTB新生兒，對照組包括681例足月新生兒。病例組按照是否合并PROM，可分為:有PROM組（PPROM組）和無PROM組;按照SPTB新生兒出

7、生時胎齡的大小，可分為3個亞組:超早產(chǎn)組（胎齡≤28周）、極早產(chǎn)組（28周＜胎齡≤32周）和輕度早產(chǎn)組(33周＜胎齡≤36周);超早產(chǎn)組和極早產(chǎn)組可合并起來組成重度早產(chǎn)組（胎齡≤32周）。運用傳統(tǒng)的PCR-RFLP(PCR-based restriction fragment length polymorphism analysis，PCR-RFLP)技術(shù)、PCR-測序技術(shù)和最新的Sequenom MassARRAY(R)SNP檢測技術(shù)

8、分別對候選基因的多態(tài)性位點進行SNP分型。每一個SNP位點的等位基因和基因型頻率通過記數(shù)確定，用頻數(shù)（百分率）表示，采用卡方(x2)檢驗分析病例組和對照組中每個等位基因和基因型的分布頻率。通過Logistic回歸分析矯正母親年齡和嬰兒性別后，在五種遺傳模式中對每個基因的SNP位點與SPTB發(fā)生的關(guān)聯(lián)性進行風(fēng)險評估，用所得的比值比(odds ratios，ORs)及95％的置信區(qū)間(confidence intervals，CIs)表示風(fēng)

9、險強度。所有的統(tǒng)計檢驗均為雙側(cè)概率，P＜0.05被認為有統(tǒng)計學(xué)意義。通過酶聯(lián)免疫吸附實驗(Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA)，檢測RANTES在SPTB新生兒和足月新生兒血清中的濃度，每一份血清標本都被重復(fù)檢測兩次。
　　結(jié)果:
　　1.MCP-1基因G-2518A多態(tài)性位點與SPTB的患病風(fēng)險無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián);與合并或不合并PROM的SPTB的患病風(fēng)險均無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)。然

10、而，與攜帶至少一個-2518G等位型（GG+GA基因型）的個體相比，攜帶-2518AA基因型的個體發(fā)生超早產(chǎn)(OR2.74;95％CI，1.10-6.72; P=0.014)和極早產(chǎn)(OR2.07;95％CI，1.27-3.36;P=0.005)的風(fēng)險顯著升高。即使將超早產(chǎn)和極早產(chǎn)新生兒合并起來，攜帶-2518 AA基因型的個體發(fā)生SPTB的風(fēng)險仍然顯著升高(OR2.23;95％CI，1.40-3.54; P＜0.001)。
　　

11、2.RANTES基因In1.1T/C多態(tài)性位點的CC基因型可顯著增加SPTB的患病風(fēng)險(OR1.44;95％CI，1.01-2.05;P=0.043)。相對于T等位型（TT+TC基因型），CC基因型與不合并PROM的SPTB的患病風(fēng)險升高有臨界的相關(guān)性(OR1.48;95％CI，1.00-2.19; P=0.05);另外，早產(chǎn)兒血清中RANTES的濃度要明顯低于足月兒;而在早產(chǎn)兒中，攜帶In1.1CC基因型的早產(chǎn)兒，其血清中RANTES

12、的表達水平顯著降低(P＜0.001)。
　　3.在所有樣本中，TNF-α基因G-308A多態(tài)性位點各等位基因分布頻率和基因型的構(gòu)成比在病例組和對照組之間無顯著性差異，TNF-αG-308A位點與SPTB的患病風(fēng)險無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)（OR0.85;95％CI，0.61-1.19;P=0.35）;與合并或不合并PROM的SPTB的患病風(fēng)險均無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)(OR0.77;95％CI，0.45-1.31;P=0.32; OR0.88;

13、95％CI，0.62-1.27; P=0.51);與超早產(chǎn)(OR0.39;95％CI，0.12-1.28;P=0.08)、極早產(chǎn)(OR0.68;95％CI，0.38-1.19;P=0.16)和輕度早產(chǎn)(OR1.02;95％CI，0.71-1.46; P=0.92)的患病風(fēng)險也均無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)。
　　4.在所有樣本中，IL-15基因rs10833多態(tài)性位點與SPTB的患病風(fēng)險無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)，與超早產(chǎn)、極早產(chǎn)和輕度早產(chǎn)的患病風(fēng)

14、險均無顯著的遺傳學(xué)關(guān)聯(lián)。然而，不論是否合并PROM，A等位型（GA+AA基因型）都與SPTB的患病風(fēng)險顯著相關(guān)(OR0.46;95％CI,0.23-0.92; P=0.017; OR1.47;95％CI,1.04-2.09; P=0.031)。
　　5.與攜帶IL-1β基因C+3953T多態(tài)性位點的CC基因型的個體相比，攜帶至少一個T等位基因型（CT+TT基因型）的個體發(fā)生SPTB(OR1.63;95％CI，1.02-2.59;P

15、=0.036)、合并PROM的SPTB（PPROM）（OR2.36;95％CI，1.32-4.23;P=0.005）和輕度早產(chǎn)（OR1.79;95％CI，1.09-2.94;P=0.022）的風(fēng)險顯著升高。
　　6.與攜帶MMP-8基因C-799T多態(tài)性位點-799 CC基因型的個體相比，攜帶至少一個-799 T等位型（CT+TT基因型）的個體發(fā)生SPTB(OR0.79;95％CI，0.63-0.97;P=0.027)、合并PRO

16、M的SPTB(PPROM)（OR0.67;95％CI，0.49-0.92;P=0.014）以及輕度早產(chǎn)(OR0.78;95％CI，0.61-0.99;P=0.037)的風(fēng)險顯著降低。與攜帶至少一個C等位型（CC+CT基因型）的個體相比，TT基因型與不合并PROM的SPTB的患病風(fēng)險的降低有臨界的相關(guān)性(OR0.71;95％CI，0.50-1.00; P=0.049)
　　結(jié)論:
　　1.MCP-1基因G-2518A多態(tài)性位點

17、、RANTES基因In1.1 T/C多態(tài)性位點、IL-15基因rs10833多態(tài)性位點、IL-1β基因C+3953T多態(tài)性位點和MMP-8基因C-799T多態(tài)性位點，這些SNP位點可以影響SPTB的遺傳易感性。
　　2.早產(chǎn)兒血清中的RANTES濃度要明顯低于足月兒，RANTES In1.1 T/C位點的CC基因型和早產(chǎn)兒血清中RANTES的低表達相關(guān)，提示RANTES基因In1.1 T/C多態(tài)性位點可通過調(diào)控血清中RANTES的