EGF和hTERT基因多態(tài)性與乳腺癌易感性的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、乳腺癌是全世界女性最常見的惡性腫瘤，已成為威脅女性健康的最重要疾病之一。世界范圍內(nèi)乳腺癌發(fā)病呈不斷上升的趨勢，我國雖屬女性乳腺癌的低發(fā)病區(qū)，但近年來乳腺癌的發(fā)病率逐年快速增長，尤其在滬、京等地區(qū)，乳腺癌的發(fā)病率已高居女性惡性腫瘤發(fā)病率的第一、第二位。乳腺癌嚴(yán)重威脅著女性的健康和生命，對社會(huì)、經(jīng)濟(jì)、家庭和婦女心理造成極大的影響。如何識(shí)別乳腺癌的高危人群，降低乳腺癌的發(fā)病率，是擺在我們面前的重要問題。但乳腺癌病因尚不明確，發(fā)病機(jī)制也十分復(fù)雜

2、，目前認(rèn)為乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展是環(huán)境與遺傳因素共同作用的結(jié)果。不同遺傳背景的個(gè)體在相同的危險(xiǎn)因素暴露下發(fā)生乳腺癌的危險(xiǎn)性不同，說明遺傳背景的差異影響了個(gè)體癌癥易感性的高低。因此，識(shí)別乳腺癌易感基因是鑒別乳腺癌高危人群的關(guān)鍵。眾所周知，乳腺癌的高共顯性基因BRCAl、BRCA2突變是乳腺癌的強(qiáng)危險(xiǎn)因素，但BRCAl、BRCA2突變在一般人群中對乳腺癌發(fā)病的貢獻(xiàn)很小，僅占5％以下，故認(rèn)為大部分的乳腺癌易感性與常見的低共顯性基因的遺傳變異有關(guān)。

3、尋找與乳腺癌遺傳易感性相關(guān)的常見低共顯性基因是目前研究的一個(gè)熱點(diǎn)。 研究表明，在乳腺癌的病理進(jìn)程中，雌激素起了重要的作用。表皮生長因子(EGF)作為強(qiáng)有力的有絲分裂劑，具有類雌激素作用，同樣在乳腺癌的發(fā)生發(fā)展過程中扮演了重要的角色。EGF在組織中的過表達(dá)可持續(xù)性激活多條信號(hào)傳導(dǎo)通路，促進(jìn)DNA合成，加速細(xì)胞的分裂和增殖，抑制細(xì)胞的凋亡，從而促進(jìn)乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展。已有研究發(fā)現(xiàn)，EGF基因啟動(dòng)子區(qū)的單核苷酸多態(tài)性(Single n

4、ucleotidepolymorphisms，SNPs)不僅與外周血EGF水平有關(guān)，而且與癌癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)。同時(shí)，由于EGF可以通過啟動(dòng)Ras-MAPK信號(hào)通路，激活端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)，上調(diào)hTERT mRNA的表達(dá)，而該酶的激活可促使端粒不再隨細(xì)胞分裂而縮短，細(xì)胞得以無限制的增殖下去，最終導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。并且，hTERT在正常人類體細(xì)胞中不表達(dá)，但是在包括乳腺癌在內(nèi)的多種腫瘤中表達(dá)。故推測EGF、hTERT的SNPs及血漿

5、EGF水平可能與乳腺癌遺傳易感性有關(guān)。 本研究旨在通過血清流行病學(xué)和分子流行病學(xué)相結(jié)合的手段，采用病例對照研究方法，對血漿EGF水平以及EGF基因啟動(dòng)子區(qū)SNPs和hTERT的功能性SNPs與乳腺癌遺傳易感性的關(guān)系進(jìn)行研究，進(jìn)一步闡明乳腺癌的發(fā)病機(jī)制和發(fā)現(xiàn)與我國人群乳腺癌遺傳易感性相關(guān)的危險(xiǎn)基因型，并將其作為分子標(biāo)志物用于篩選高危人群，從而為今后乳腺癌的早期診斷和早期治療提供科學(xué)依據(jù)。 第一部分表皮生長因子基因(EGF)

6、啟動(dòng)子區(qū)多態(tài)性、血漿EGF水平與乳腺癌易感性的病例對照研究研究發(fā)現(xiàn)，EGF啟動(dòng)子對EGF的表達(dá)起關(guān)鍵的調(diào)控作用，提示該區(qū)域的遺傳變異可能影響不同個(gè)體EGF的表達(dá)水平，進(jìn)而影響疾病的易感性。已有研究表明，EGF 啟動(dòng)子區(qū)G6lA 位點(diǎn)的突變可降低外周血EGF的水平，且降低患惡性黑色素瘤的風(fēng)險(xiǎn)。因此，EGF基因啟動(dòng)子區(qū)域的多態(tài)性改變可能潛在地影響其表達(dá)(血漿水平)從而改變個(gè)體對腫瘤的易感性。 本研究探討了EGF基因啟動(dòng)子區(qū)稀有等位基

7、因頻率(MAF，minor allele frequency)高于0.05的多態(tài)性改變(G61A、G-1380A和A-1744G)及血漿中EGF水平與乳腺癌發(fā)病的關(guān)聯(lián)。采用病例對照研究設(shè)計(jì)，選擇經(jīng)組織學(xué)確診的629例新發(fā)乳腺癌病例和694例年齡和地區(qū)匹配的無腫瘤史的健康對照。采用PCR-RFLP(RestrictionFragment Length Polymorphism，限制性片斷長度多態(tài)性)、PCR-PIRA(Primer Int

8、roduced Restriction Analysis，引物引入限制性分析)法設(shè)計(jì)引物和內(nèi)切酶進(jìn)行基因分型。采用ELISA(Enzyme-LinkedImmunosorbnent Assay，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn))法進(jìn)行血漿EGF水平的檢測。此外，基因型檢測采用盲法，并隨機(jī)抽取10％樣本重復(fù)檢測進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制。最后，我們成功獲得604例(96.0％)乳腺癌病例和654例(94.2％)對照的MNS16A基因型。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)

9、各基因型在病例組和對照組之間的分布沒有顯著差異，單因素和多因素logistic回歸分析未發(fā)現(xiàn)EGF基因啟動(dòng)子區(qū)的三個(gè)單核苷酸多態(tài)性改變(G61A、G-1380A和A-1744G)與乳腺癌發(fā)生存在關(guān)聯(lián)。(2)乳腺癌患者中血漿EGF的平均水平(249.06±197.54 pg/m1)顯著低于對照組(982.41±375.57 pg/ml，P<0.001)。血漿中EGF的高水平顯著降低乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，且血漿EGF水平與乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)呈現(xiàn)顯

10、著的劑量反應(yīng)關(guān)系。(3)在對照人群中，攜帶EGF.1380AA基因型的個(gè)體血漿中EGF水平顯著高于攜帶野生型(-1380GG)的個(gè)體(1308.87 pg/ml vs 946.87pg/ml，P=0.003). 本研究結(jié)果表明，血漿中高水平EGF可能對乳腺癌發(fā)病起保護(hù)作用，且EGFG-1380A的突變可能是血漿EGF水平的調(diào)節(jié)因子。 第二部分端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶基因(hTERT)的功能性多態(tài)與乳腺癌易感性及表型的病例對照研究已

11、有研究發(fā)現(xiàn)，hTERT的一個(gè)串連重復(fù)序列多態(tài)(MNS16A)可調(diào)控該基因的表達(dá)，影響端粒酶活性，從而可能潛在地影響個(gè)體對腫瘤的易感性。本病例對照研究中，我們探討了hTERT基因串連重復(fù)序列多態(tài)(MNS16A)與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及其表型的關(guān)聯(lián)。我們選擇經(jīng)組織學(xué)確診的1029例新發(fā)乳腺癌病例和1107例年齡和地區(qū)匹配的無腫瘤史的健康對照。采用PCR擴(kuò)增的方法檢測MNSl6A的基因型，盲法進(jìn)行基因型的判讀，隨機(jī)選擇10％(213個(gè))的樣本進(jìn)行盲

12、法復(fù)測。最后，我們成功獲得1006例(97.8％)乳腺癌病例和1095例(99.3％)對照的MNS16A基因型。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：(1)MNS16A多態(tài)性改變與乳腺癌的易感性有顯著關(guān)聯(lián)，其突變基因型可顯著增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并且該作用在年齡≥50歲、絕經(jīng)后、具有腫瘤家族史、初潮年齡早(<16歲)、首胎活產(chǎn)年齡晚(>25歲)的婦女中更為顯著。(2)將乳腺癌患者按有/無腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移進(jìn)行分組后發(fā)現(xiàn)，MNSl6A的302/271基因型在兩