熱休克蛋白70、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94和免疫球蛋白G在胎盤腫瘤中的表達(dá)、共定位及其意義的研究.pdf

1、熱休克蛋白(heatshockprotein，HSP)是細(xì)胞受到各種刺激時(shí)產(chǎn)生的一類具有重要生理功能和高度保守的多肽類蛋白質(zhì)分子家族,普遍存在于原核和真核生物細(xì)胞中，在應(yīng)激狀態(tài)下可被誘導(dǎo)表達(dá)。在哺乳動(dòng)物的細(xì)胞中，熱休克蛋白被分為Hsps和Grps，HSP70和GRP94分別是他們中的一員，在正常細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)展的過(guò)程中，HSP70和GRP94持續(xù)地處于低表達(dá)狀態(tài)，但當(dāng)處于應(yīng)激狀態(tài)時(shí)將持續(xù)高表達(dá)。研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞中在沒(méi)有任何刺激下H

2、SP70和GRP94都將高表達(dá)并且與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)系。在過(guò)去免疫球蛋白G被認(rèn)為是人類免疫系統(tǒng)最普遍和最重要的蛋白且只能由分化成熟的B淋巴細(xì)胞分泌，最近的研究發(fā)現(xiàn)一些人類腫瘤也能產(chǎn)生IgG。HSP70在葡萄胎中的表達(dá)以及HSP70與IgG在肝癌共定位的關(guān)系已有相關(guān)文獻(xiàn)的報(bào)道，但關(guān)于HSP70，GRP94和IgG在胎盤腫瘤的表達(dá)以及HSP70和GRP94分別與IgG的關(guān)系尚未見報(bào)道。
　　本課題研究目的：(1).探討HSP70，G

3、RP94和IgG在胎盤腫瘤中的表達(dá)及意義。(2).研究HSP70，GRP94與IgG的共定位關(guān)系及其意義，為腫瘤細(xì)胞內(nèi)免疫機(jī)制的存在提供一定的依據(jù)。方法:(1).利用免疫組化研究HSP70，GRP94和IgG在胎盤腫瘤中的表達(dá)，同時(shí)利用Image-ProPlus進(jìn)行抗原表達(dá)量的分析。(2).利用免疫熒光雙標(biāo),激光共聚焦顯微鏡分析并初步證實(shí)在胎盤腫瘤組織和絨毛膜癌細(xì)胞系中存在HSP70，GRP94和IgG的共定位。(3).利用RT-PCR

4、證明HSP70，GRP94和IgG的基因表達(dá)。結(jié)果：免疫組化的結(jié)果顯示39例葡萄胎有31例表達(dá)HSP70，陽(yáng)性率為79.4％，有34例表達(dá)GRP94，陽(yáng)性率為87.1％，有35例表達(dá)IgG，陽(yáng)性率為89％。20例絨毛膜癌中有15例表達(dá)HSP70，陽(yáng)性率為75％，有16例表達(dá)GRP94，陽(yáng)性率為80％，有18例表達(dá)IgG，陽(yáng)性率為90％。HSP70在胞漿胞核中均表達(dá)，主要表達(dá)在胞核中，GRP94和IgG主要表達(dá)在胞漿中，而且HSP70，G

5、RP94在絨毛膜癌中細(xì)胞的表達(dá)要比在葡萄胎中細(xì)胞的表達(dá)強(qiáng)(P=0.03，P=0.04)，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)在葡萄胎中HSP70在細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞比合體滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)強(qiáng)(P<0.01)，GRP94和IgG是合體滋養(yǎng)層細(xì)胞比細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞表達(dá)要強(qiáng)(P<0.01)。另外還發(fā)現(xiàn)在20例絨毛膜癌中HSP70，GRP94和IgG表達(dá)都比癌旁組織表達(dá)強(qiáng)(P<0.01)，這些結(jié)果表明HSP70，GRP94的表達(dá)可能與腫瘤的良惡性程度有關(guān)系。59例胎盤腫瘤組織中4

6、2例有HSP70和IgG的共表達(dá)，48例有GRP94和IgG的共表達(dá)，通過(guò)免疫熒光發(fā)現(xiàn)在部分胎盤腫瘤細(xì)胞中可見HSP70，GRP94分別與IgG的共定位，為了排除他們可能來(lái)自非特異吸收，我們?cè)隗w外培養(yǎng)了絨毛膜癌細(xì)胞，也發(fā)現(xiàn)存在HSP70，GRP94和IgG的共定位，同時(shí)利用RT-PCR證明了HSP70，GRP94和IgG存在基因的表達(dá)。結(jié)論：HSP70，GRP94在胎盤腫瘤的表達(dá)與胎盤腫瘤的分化程度有關(guān)系，初步證實(shí)了HSP70，GRP9