T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：
　　結(jié)直腸癌是目前最常見(jiàn)并具有高死亡率的消化道惡性腫瘤之一，它的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟、多階段及多基因參與的細(xì)胞遺傳性疾病。但隨著對(duì)結(jié)直腸癌發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)免疫細(xì)胞在結(jié)直腸癌組織內(nèi)的功能減弱或喪失和腫瘤的免疫逃逸機(jī)制，使機(jī)體不能發(fā)揮應(yīng)有的免疫效應(yīng)如:識(shí)別腫瘤抗原、清除腫瘤細(xì)胞，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生和進(jìn)展。T細(xì)胞，尤其是細(xì)胞毒性T細(xì)胞在腫瘤免疫中發(fā)揮最主要的作用。然而，腫瘤患者體內(nèi)的T細(xì)胞尤其是在腫瘤組織中的T細(xì)胞處于T

2、細(xì)胞功能紊亂甚至沒(méi)有免疫功能—即“T細(xì)胞功能耗竭”的狀態(tài)。目前對(duì)于導(dǎo)致這種現(xiàn)象的機(jī)制研究尚不清楚。T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3是Tim家族的一個(gè)新成員。研究發(fā)現(xiàn)Tim-3在病毒感染和腫瘤免疫反應(yīng)負(fù)性調(diào)節(jié)中起了重要的作用。研究發(fā)現(xiàn)，Tim-3可致腫瘤患者體內(nèi)的T細(xì)胞功能紊亂和耗竭，以Tim-3為靶點(diǎn)治療可以部分恢復(fù)HCV和HIV患者T細(xì)胞的免疫功能。近來(lái)，另有研究顯示:Tim-3蛋白高表達(dá)惡性腫瘤患者的預(yù)后差。在黑色素瘤動(dòng)物模型上用Tim-3

3、單抗進(jìn)行治療可以抑制黑色素瘤的生長(zhǎng)、侵襲、遷移。然而，對(duì)于Tim-3表達(dá)和結(jié)直腸腫瘤的關(guān)系目前仍不清楚。我們的研究目的是:
　　1.研究Tim-3在結(jié)直腸癌的表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系，進(jìn)一步推測(cè)Tim-3在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展中所起的作用，從而為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。
　　2.將Tim-3的表達(dá)和相關(guān)通路聯(lián)系起來(lái)，探討可能的致瘤和導(dǎo)致腫瘤進(jìn)展的機(jī)制。
　　3.將Tim-3蛋白的表達(dá)和臨床病理因素的關(guān)系進(jìn)行分析，并探討可能影響結(jié)直腸癌預(yù)

4、后的危險(xiǎn)因素。
　　方法：
　　1.通過(guò)Western blot，實(shí)時(shí)定量聚合酶連鎖反應(yīng)(quantificational real-timepolymerase chain reaction，qRT-PCR)和細(xì)胞免疫化學(xué)來(lái)探究Tim-3在四種結(jié)直腸癌細(xì)胞株(HT-29，HCT116，LoVo，SW620)中的表達(dá)，并運(yùn)用蛋白免疫印跡方法分析STAT3和pSTAT3在結(jié)直腸癌細(xì)胞系的表達(dá)。
　　2.收集結(jié)直腸癌患者術(shù)

5、后腫瘤組織和配對(duì)的正常組織各201例，制備成組織切片。通過(guò)免疫組化的方法來(lái)分析Tim-3在腫瘤組織的表達(dá)。收集結(jié)直腸癌患者的臨床病理資料（包括:性別、年齡、腫瘤分化、脈管癌栓、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、TNM分期）并統(tǒng)計(jì)分析其與Tim-3表達(dá)的相關(guān)性，進(jìn)一步探討影響結(jié)直腸癌預(yù)后的相關(guān)因素分析。
　　結(jié)果：
　　1.在結(jié)直腸癌細(xì)胞系中Tim-3在mRNA表達(dá)水平上無(wú)差異，而在蛋白表達(dá)水平上有顯著差異。另外，本研究參與

6、的細(xì)胞系均表達(dá)STAT3，但只有HCT116表達(dá)pSTAT3。免疫細(xì)胞化學(xué)顯示:Tim-3蛋白表達(dá)于HT-29和SW620的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，而表達(dá)于HCT116和LoVo的細(xì)胞質(zhì)。
　　2.在結(jié)直腸癌組織和正常組織中的結(jié)果顯示:92.5％的結(jié)直腸癌標(biāo)本表達(dá)Tim-3，其中58.7％的標(biāo)本Tim-3表達(dá)的HSCORE計(jì)數(shù)≥200，33.8％的腫瘤組織Tim-3表達(dá)HSCORE計(jì)數(shù)＜200，7.4％的結(jié)直腸癌標(biāo)本無(wú)Tim-3表達(dá)。86

7、.6％的正常組織表達(dá)Tim-3。然而，結(jié)直腸癌組織表達(dá)的Tim-3蛋白明顯高于正常組織(P＜0.0001)。
　　3.Tim-3蛋白的表達(dá)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目、TNM分期存在密切關(guān)系（所有P＜0.0001）。然而Tim-3蛋白與患者的性別、年齡、脈管癌栓、腫瘤的分化程度、腫瘤的浸潤(rùn)深度及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。盡管Tim-3蛋白的表達(dá)和腫瘤的浸潤(rùn)深度無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，我們的研究發(fā)現(xiàn)Tim-3蛋白的表達(dá)水平在分化中/低和T

8、3/T4的患者中顯著高于分化程度好和T1/T2的患者。
　　4.根據(jù)結(jié)直腸癌患者的隨訪數(shù)據(jù)顯示:54例患者死于結(jié)直腸癌(26.9％)。在死亡的病例中，Tim-3蛋白表達(dá)HSCORE計(jì)數(shù)≥200的結(jié)直腸癌患者的103個(gè)月的生存率明顯短于Tim-3蛋白表達(dá)HSCORE計(jì)數(shù)＜200的結(jié)直腸癌患者(P＜0.0001，log-rank test)。TNM分期(P=0.003)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.011)、脈管癌栓(P=0.002)和Tim-

9、3蛋白表達(dá)(P＜0.0001)可以作為結(jié)直腸癌患者預(yù)后獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。
　　結(jié)論：
　　本研究證實(shí)了結(jié)直腸癌細(xì)胞表達(dá)Tim-3。此外，我們研究發(fā)現(xiàn)Tim-3蛋白的表達(dá)強(qiáng)度可以作為結(jié)直腸癌患者判斷預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。另外，結(jié)直腸癌細(xì)胞系表達(dá)STAT3和pSTAT3，為我們對(duì)Tim-3后續(xù)的研究奠定了基礎(chǔ)。本研究也讓我們對(duì)結(jié)直腸癌的預(yù)后相關(guān)因素有了更深的認(rèn)識(shí)，將脈管癌栓、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分期和Tim-3蛋白表達(dá)結(jié)合起來(lái)作為判斷結(jié)直腸癌