慢性乙型肝炎患者肝組織及血清T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3水平及其臨床意義.pdf

1、目的:慢性HBV感染是造成慢性肝臟損傷的重要原因，而HBV感染慢性化機制尚未明確。大量研究證明，HBV感染轉(zhuǎn)歸與HBV特異性免疫應答強度相關(guān)，并且受到諸多免疫調(diào)控因子影響。T細胞免疫球蛋白黏蛋白分子-3（T cell immunoglobulin and mucin-3，Tim-3）是近年發(fā)現(xiàn)的與自身免疫調(diào)控相關(guān)的T細胞表面蛋白分子，主要選擇性表達于Th1細胞表面。本研究旨在通過觀察慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，

2、CHB)患者血清中Tim-3、IFN-γ含量及Tim-3在肝組織中表達水平，評價Tim-3表達與肝臟炎癥活動程度相關(guān)性，探討其在HBV感染免疫調(diào)節(jié)機制中的作用。
　　方法:從河北醫(yī)科大學第三醫(yī)院感染科門診及住院患者隨機選取CHB患者25例，HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)患者23例，征集同期于本醫(yī)院健康體檢者20例作為健康對照，收集所有觀察對象晨起空腹外周血血清。同

3、時收集接受肝組織穿刺術(shù)的CHB患者肝組織標本16例，接受肝移植術(shù)的HBV相關(guān)ACLF患者肝組織標本13例，以及健康供肝肝組織7例。為了研究Tim-3表達與HBV感染炎癥損傷之間關(guān)系，我們進一步納入了接受肝組織活檢CHB患者肝組織標本共計54例，根據(jù)炎癥活動度分為輕、中、重度三組。CHB診斷符合中華醫(yī)學會肝病學分會、中華醫(yī)學會感染病學分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南(2010版)》，HBV相關(guān)ACLF診斷符合中華醫(yī)學會感染病學分會肝衰竭與

4、人工肝學組、中華醫(yī)學會肝病學分會重型肝病與人工肝學組共同制定的《肝衰竭診療指南（2012年版）》。收集各組研究對象常規(guī)生化學指標，如白蛋白(albumin，ALB)、丙氨酸轉(zhuǎn)移酶(alaninetransaminase，ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)移酶（aspartate transam inase，AST）、總膽紅素(total bilirubin，TB)、直接膽紅素(direct bilirubin，DB)等，檢測CHB患者及HBV相關(guān)AC

5、LF患者血清HBV-DNA水平。應用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清Tim-3及IFN-γ水平，免疫組織化學檢測不同炎癥分級CHB患者肝組織內(nèi)Tim-3表達，并通過實時熒光定量PCR檢測肝組織Tim-3 mRNA表達水平。
　　結(jié)果:
　　1、各組研究對象年齡及性別比例均具有可比性。CHB組患者ALB水平明顯高于ACLF組（P＜0.01），ALT、AST、TB、DB水平均顯著低于ACLF組（P＜0.01），CHB組與ACLF組間HBV

6、 DNA水平無明顯差異(P＞0.05)。
　　2、CHB組Tim-3水平（175.607±111.19 pg/ml）及ACLF組（1525.57±1905.21 pg/ml）較健康對照組（78.03±63.68 pg/ml）明顯升高(P＜0.05，P＜0.01)。ACLF組血清Tim-3水平顯著高于CHB組(P＜0.05)。
　　3、CHB組患者血清IFN-γ水平（506.85±318.75 pg/ml）較健康對照組（759

7、.62±160.38 pg/ml）明顯下降（P＜0.05）。ACLF組患者IFN-γ水平（2898.34±2464.51 pg/ml）顯著高于CHB組（P＜0.01）及健康對照組(P＜0.05)。
　　4、CHB組患者血清Tim-3水平與ALT水平有顯著相關(guān)性(r=0.6468，P＜0.01)。ACLF患者血清Tim-3水平與ALB呈負相關(guān)，與ALT、AST水平呈正相關(guān)（r=-0.4422，0.7423，0.8006，P均＜0.0

8、1）。各組研究對象血清Tim-3水平與其余生化學指標無明顯相關(guān)(P＞0.05)。
　　5、肝組織中Tim-3表達水平與炎癥活動度相關(guān)。共計54例CHB患者接受肝組織Tim-3表達水平檢測。按炎癥活動度分為三組:輕度組(G0-G1)24例，中度組(G1-G2)20例及重度組（G3及以上）10例。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，Tim-3主要表達于肝內(nèi)炎性細胞。三組間Tim-3陽性細胞計數(shù)有顯著差異，隨著炎癥活動度升高Tim-3陽性計數(shù)明顯增大。具體為

9、:輕度組（19.9±10.0）個/高倍視野，中度組（146.7±48.6）個/高倍視野，重度組（317.7±74.2）個/高倍視野，各組間比較差異均具有統(tǒng)計學意義，P均＜0.01。相關(guān)性分析顯示，CHB患者肝組織內(nèi)Tim陽性細胞計數(shù)與肝臟炎癥活動度呈明顯相關(guān)，r=0.9227，P＜0.01。
　　6、CHB患者及HBV相關(guān)ACLF患者肝組織內(nèi)Tim-3水平明顯升高。ACLF組肝組織內(nèi)Tim-3 mRNA水平（2.681±0.34）

10、明顯高于CHB組(1.20±0.39)及健康對照組（0.36±0.19），P均＜0.01。CHB組患者肝組織內(nèi)Tim-3水平高于健康對照組，差異具有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。
　　結(jié)論:
　　1、慢性乙型肝炎患者血清Tim-3表達上調(diào)，IFN-γ水平低下，提示Tim-3在HBV感染慢性化中發(fā)揮作用，推測其機制可能通過下調(diào)IFN-γ合成和（或）分泌，進而影響HBV清除。
　　2、Tim-3表達水平與肝臟炎癥活動度相關(guān)，