自制微透析探針性能評價及其在中藥體內(nèi)分析中的應(yīng)用研究.pdf

1、中藥自身的特點決定了其體內(nèi)代謝過程的特殊性與復雜性。微透析技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)原位、在體取樣，實時反映游離藥物在體內(nèi)的分布及代謝消除情況，在中藥體內(nèi)分析領(lǐng)域具有巨大的應(yīng)用潛力。由于目前微透析系統(tǒng)及探針進口自少數(shù)國外廠家，探針價格昂貴且使用次數(shù)有限，極大提高了該技術(shù)的使用成本。 本文以實驗驗證自制微透析探針使用性能為起點，在確保自制探針穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)上，采用微透析取樣技術(shù)，對中藥葛根有效成分葛根素的游離型藥物分子在大鼠體內(nèi)的經(jīng)時變化過程、

2、組織分布以及磷酸糖蛋自在藥物吸收過程中的影響進行了初步探討。主要研究內(nèi)容及結(jié)果包括以下幾個方面： (1)以自制微透析探針為研究對象，通過體外芍藥苷微透析實驗,評估灌注液流速、人工細胞外液中藥物濃度、回收率測定方法及半透膜性質(zhì)對自制同軸型微透析探針取樣回收率的影響。實驗結(jié)果表明：自制探針的回收率隨灌注液流速升高呈近似指數(shù)曲線降低；當灌注流速為8.0 μL/min時，回收率表現(xiàn)出濃度依賴性；采用直接透析法或反向透析法所得同一探針回收

3、率存在一定偏差；回收率因探針不同而存在差異；探針在體內(nèi)連續(xù)取樣6 h，半透膜的通量未見衰減。實驗室自制探針性能穩(wěn)定，可用于體內(nèi)微透析研究。 (2)基于葛根素在堿性條件下具有熒光這一天然屬性，采用了高效液相色譜一柱后修飾熒光檢測器聯(lián)用的分析方法，對取自大鼠頸靜脈和肝臟的透析液中游離態(tài)葛根素濃度進行連續(xù)測定。該分析方法中葛根素的檢測限為0.0014μg/mL，(S/N=3)。同軸以及線型探針植入體內(nèi)之前以及取樣完畢取出之后,分別進行

4、體外回收率測定，結(jié)果表明兩種探針在體內(nèi)取樣過程中，半透膜通量未發(fā)生變化。同軸及線型探針經(jīng)反透析法測定的體內(nèi)回收率分別為(11.4±2.09)％和(12.7±315)％。大鼠股靜脈注射葛根素30 mg/kg后，游離態(tài)葛根素快速分布于肝臟組織中，并且在隨后的消除過程中肝臟與血液表現(xiàn)出相似的消除趨勢。 (3)中藥多以口服的方式進入體內(nèi)，腸道是其代謝處置的重要部位，其上廣泛分布的磷酸糖蛋白對某些藥物的代謝過程具有重要影響。通過設(shè)計對照組

5、實驗，采用微透析技術(shù)比較研究磷酸糖蛋白抑制劑維拉帕米對體內(nèi)游離態(tài)葛根素藥動學行為的影響。結(jié)果顯示，聯(lián)合給予維拉帕米后，游離態(tài)葛根素的達峰濃度大幅提高(p<0.05)；Auc值為單獨給予葛根提取物組的2.11倍。表明維拉帕米有可能通過抑制腸道的磷酸糖蛋白和CYP3A4酶，一方面減弱磷酸糖蛋白的外排作用，另一方面減少CYP3A4酶對葛根素的代謝，從而減少首過效應(yīng)，增加葛根素的吸收，提高其生物利用度。實驗數(shù)據(jù)還顯示，游離態(tài)葛根素在兩組實驗動物