志賀氏菌福氏2a 2457T全菌蛋白質(zhì)組圖譜的重建及功能研究.pdf

1、志賀氏菌屬(Shigellaspp.)細(xì)菌能夠通過(guò)侵襲腸上皮細(xì)胞引起患者典型的菌痢癥狀(發(fā)熱、腹痛、腹瀉)。福氏志賀氏菌(Shigella.flexneri)是發(fā)展中國(guó)家衛(wèi)生條件較差地區(qū)痢疾流行的主要病原菌。由于對(duì)志賀氏菌致病機(jī)理還不十分清楚，目前仍末研制出非常有效的疫苗。因此構(gòu)建該菌的蛋白質(zhì)組學(xué)圖譜，描述了一定條件下細(xì)胞的全部蛋白質(zhì)表達(dá)狀況對(duì)于開(kāi)發(fā)相關(guān)疫苗具有一定的指導(dǎo)意義。
　　 論文分別制備了不同培養(yǎng)溫度(37℃和30℃)

2、和不同時(shí)相(對(duì)數(shù)生長(zhǎng)中期和平臺(tái)期)的2457T全細(xì)胞蛋白樣品，然后通過(guò)雙向電泳分離、從電泳凝膠上切取蛋白質(zhì)點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切、MALDI-TOF/TOF質(zhì)譜檢測(cè)，最后用Mascot軟件在相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)中搜索與之匹配的蛋白質(zhì)，分析了其功能，取得了以下主要結(jié)果:(1)采用重疊的窄膠條進(jìn)行雙向電泳，獲得了重復(fù)性好、分辨率高的雙向電泳圖譜。
　　 (2)在四張不同擬合膠圖中對(duì)表達(dá)豐度較高，肉眼可見(jiàn)的不重復(fù)的869個(gè)蛋白點(diǎn)進(jìn)行膠內(nèi)酶切，其中鑒定

3、分值有效的蛋白點(diǎn)755個(gè)，對(duì)應(yīng)了588個(gè)蛋白，其中70個(gè)為假想蛋白。鑒定的蛋白占總基因組預(yù)測(cè)蛋白的13.6%。在膠上所鑒定的蛋白的等電點(diǎn)和分子量與理論值相符，但也存在一定差異，揭示翻譯后修飾普遍存在。
　　 (3)對(duì)所鑒定的蛋白在代謝通路中定位，發(fā)現(xiàn)鑒定的蛋白主要分布在三羧酸循環(huán)、糖酵解、嘌呤和嘧啶的代謝通路中，這些蛋白對(duì)于細(xì)菌的生命活動(dòng)來(lái)說(shuō)都足比較重要的。
　　 (4)通過(guò)比較蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，對(duì)差異蛋白研究發(fā)現(xiàn)在相同