福氏志賀菌血清型多重PCR分型方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、目的：
　　 針對O抗原合成基因wzx和O抗原的修飾基因gtrⅠ，gtrⅠc，gtrⅡ，oac，gtrⅣ,gtrⅤ和gtrX設(shè)計引物，以常見的14種福氏志賀菌血清型（包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、X、Xv、Y、和F6）為標(biāo)準(zhǔn)菌株，建立福氏志賀菌血清型多重PCR分型方法。
　　 方法：
　　 多重PCR：根據(jù)O抗原的合成基因wzx和O抗原的修飾基因gtrⅠ，gtrⅠc，gtrⅡ,o

2、ac，gtrⅣ，gtrⅤ和gtrⅩ設(shè)計并合成引物，對常見的14種福氏志賀菌血清型（包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6）建立一種多重PCR鑒定方法。
　　 有效性驗證：對不同血清型的總共358株福氏志賀菌對此方法的有效性驗證。
　　 結(jié)果：
　　 本實驗建立了針對O抗原的合成基因wzx和O抗原的修飾基因gtrⅠ，gtrⅠc，gtrⅡ，oac，gtrⅣ，gtrⅤ和gtr

3、Ⅹ的一種多重PCR鑒定方法，對常見的14種福氏志賀菌血清型（包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6）能有效進(jìn)行分子分型，并快速、有效的鑒定。
　　 用多重PCR對不同血清型的總共358株福氏志賀菌進(jìn)行分析。除了8個菌株外，其余的都符合，一致率達(dá)到97.8％。那8株菌分別為Y為5株,5a為1株，X為2株。傳統(tǒng)血清學(xué)鑒定為Y和X的菌株，多重PCR顯示為2a和2b，而5a(NCTC8523)

4、為一個新的F5。序列分析顯示：5株Y中,4株是由于gtrⅡ中移碼突變引起的：1株為4個bp的刪除(1197-1282),3株為1bp的刪除(1031bp)。另一株有完整的gtrⅡ，但是缺失可能存在于其他的地方。對于2株X菌株中，它們在gtrⅡ上都有單個bp的缺失。不規(guī)則的5a，很意外的發(fā)現(xiàn)oac基因。DNA測序顯示：在oac基因上有2個bp的缺失(345-346bp)。
　　 多重PCR一次能鑒定8個基因片段，準(zhǔn)確、快速，較傳統(tǒng)