福氏志賀菌血清型多重PCR分型方法的建立及應用.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   針對O抗原合成基因wzx和O抗原的修飾基因gtrⅠ,gtrⅠc,gtrⅡ,oac,gtrⅣ,gtrⅤ和gtrX設計引物,以常見的14種福氏志賀菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、X、Xv、Y、和F6)為標準菌株,建立福氏志賀菌血清型多重PCR分型方法。
   方法:
   多重PCR:根據O抗原的合成基因wzx和O抗原的修飾基因gtrⅠ,gtrⅠc,gtrⅡ,o

2、ac,gtrⅣ,gtrⅤ和gtrⅩ設計并合成引物,對常見的14種福氏志賀菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)建立一種多重PCR鑒定方法。
   有效性驗證:對不同血清型的總共358株福氏志賀菌對此方法的有效性驗證。
   結果:
   本實驗建立了針對O抗原的合成基因wzx和O抗原的修飾基因gtrⅠ,gtrⅠc,gtrⅡ,oac,gtrⅣ,gtrⅤ和gtr

3、Ⅹ的一種多重PCR鑒定方法,對常見的14種福氏志賀菌血清型(包括1a、1b、1c、2a、2b、3a、3b、4a、4b、5a、Y、X、Xv和F6)能有效進行分子分型,并快速、有效的鑒定。
   用多重PCR對不同血清型的總共358株福氏志賀菌進行分析。除了8個菌株外,其余的都符合,一致率達到97.8%。那8株菌分別為Y為5株,5a為1株,X為2株。傳統(tǒng)血清學鑒定為Y和X的菌株,多重PCR顯示為2a和2b,而5a(NCTC8523)

4、為一個新的F5。序列分析顯示:5株Y中,4株是由于gtrⅡ中移碼突變引起的:1株為4個bp的刪除(1197-1282),3株為1bp的刪除(1031bp)。另一株有完整的gtrⅡ,但是缺失可能存在于其他的地方。對于2株X菌株中,它們在gtrⅡ上都有單個bp的缺失。不規(guī)則的5a,很意外的發(fā)現oac基因。DNA測序顯示:在oac基因上有2個bp的缺失(345-346bp)。
   多重PCR一次能鑒定8個基因片段,準確、快速,較傳統(tǒng)

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