志賀菌的多重PCR檢測(cè)和分子分型研究.pdf

1、背景與目的：志賀菌是引起細(xì)菌性痢疾的病原體,后者在我國(guó)于1985年歸為乙類傳染病。隨著生活水平的提高和管理的加強(qiáng),其發(fā)病率不斷下降,但仍遠(yuǎn)高于發(fā)達(dá)國(guó)家。其致病的強(qiáng)弱、耐藥性等與毒力基因有關(guān)。毒力基因的檢測(cè)已作為痢疾常規(guī)監(jiān)測(cè)項(xiàng)目之一,對(duì)它的研究眾多,但多集中在單一PCR,費(fèi)時(shí)費(fèi)力。分型方法研究眾多,但對(duì)各種分型方法的比較甚少,尚沒有標(biāo)準(zhǔn)的分子生物學(xué)分型方法。本實(shí)驗(yàn)擬建立一種同時(shí)檢測(cè)志賀菌主要幾種毒力基因(setl、sen、ipaH、ial

2、、stxl、virA)的多重PCR;比較幾種常用的分型方法,找出一種更適合志賀菌檢測(cè)的分子生物學(xué)方法,為建立標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)方法提供建議。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)選取河南省2001～2007年各痢疾監(jiān)測(cè)點(diǎn)分離到的1株痢疾志賀菌、114株福氏志賀菌、11株宋內(nèi)志賀菌作為研究對(duì)象,進(jìn)行毒力基因的多重PCR建立和檢測(cè),并進(jìn)行重復(fù)外回文序列PCR、隨機(jī)PCR、質(zhì)粒圖譜分型及細(xì)菌全基因組脈沖場(chǎng)凝膠電泳,比較它們?cè)谒菰春头中蛻?yīng)用中的優(yōu)劣,并對(duì)脈沖場(chǎng)凝膠電

3、泳的結(jié)果進(jìn)行聚類分析。
　　結(jié)果：多重PCR同時(shí)檢測(cè)與單基因PCR分別檢測(cè)6種毒力基因兩種方法具有相近的靈敏度與特異性。毒力基因sen、ipaH、stxl、ial、virA和setlB的陽性率分別為88.70％、99.13%、0、88.70%、92.17%和85.22%,共10種型別。重復(fù)外回文序列PCR陽性率96.57%,擴(kuò)增出0～10條,大小在100～2000bp之間的條帶,共三個(gè)型別。隨機(jī)PCR可以很好地對(duì)志賀菌進(jìn)行分型,但