志賀菌分型與分子耐藥機制的研究.pdf

1、(第一部分) 為了解我國痢疾流行區(qū)志賀菌流行及耐藥情況，從流行區(qū)收集150株臨床分離志賀菌作血清分型與藥敏試驗。結果表明志賀菌感染的治療不宜選用萘啶酸、奧格門丁、復合磺胺和氨芐青霉素，應選慶大霉素、諾氟沙星或環(huán)丙沙星。根據生化反應和顯微鏡形態(tài)觀察，26株血清學試驗陰性的細菌可排除志賀菌。(第二部分) 氟喹諾酮類抗菌藥是目前臨床治療志賀菌感染的首選用藥，但志賀菌流行株對諾氟沙星和環(huán)丙沙星的耐藥率已分別達到15.5％和16.4％

2、。結果發(fā)現(xiàn)，喹諾酮敏感福氏志賀菌的gyrA基因與標準株相比在4個位點上存在變異(G1176-A、T1491-C、A2432-G和T2586-C)，序列同源性達99.8％。4個堿基位點的變異中，僅A2432-G可造成氨基酸殘基的改變，即Glu811-Gly(E811-G)，兩株細菌GyrA氨基酸序列同源性達99.9％。由于該流行株對喹諾酮類敏感，推測Glu811-Gly與喹諾酮類耐藥無關。(第三部分) 根據喹諾酮敏感志賀菌gyr

3、A序列設計PCR引物擴增包含上述喹諾酮類耐藥相關位點的gyrA基因片斷，用SSCP和測序等方法檢查喹諾酮類耐藥株是否存在gyrA基因突變，并采用統(tǒng)計學方法檢驗突變與喹諾酮類耐藥的相關性。測序結果顯示志賀菌流行株存在兩類gyrA突變：C42-T單位點突變(Ser83-Leu)和C42-T&A54-G雙位點突變(Ser83-Leu&Asp87-Gly)。卡方檢驗顯示C42-T突變與志賀菌流行株耐受萘啶酸相關，而A54-G突變與志賀菌流行株耐