

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、我國是乙型肝炎病毒(HBV)感染高發(fā)區(qū),乙型病毒性肝炎嚴重威脅人類的生命健康。依據(jù)HBV全基因組序列同源性≥92%或S基因序列同源性≥96%將HBV分為了A-H 8種基因型。HBV的基因型是由長期病毒突變和宿主的篩選累積形成的結(jié)果。目前的研究顯示,不同基因型HBV在流行病學(xué)特征、病毒變異、疾病表現(xiàn)和治療應(yīng)答等方面均存在著差異, HBV 的基因分型研究對進一步明確乙型肝炎發(fā)病機理、提高檢測效率、尋找治療對策和實現(xiàn)流行病學(xué)控制具有重要意義。
2、現(xiàn)有的HBV基因分型檢測方法主要有測序分型法、型特異性引物PCR基因分型法、PCR-RFLP分型法和單克隆抗體ELISA分型法等。其中,型特異性引物PCR基因分型法是一種簡單、快速、經(jīng)濟的分型方法,具有良好的應(yīng)用價值。型特異性堿基是該分型方法特異性的保證,由于HBV及其基因型的流行具有顯著的地域差異性,不同地域HBV基因組上型特異性堿基的分布情況以及不同地域相同基因型HBV的相同型特異性堿基位點的特異度也可能存在差異,因此,直接將國外現(xiàn)
3、有的型特異性引物PCR基因分型法在國內(nèi)應(yīng)用缺乏科學(xué)依據(jù),評估型特異性引物的設(shè)計合理性以及所建立分型體系的地域適用性顯得相當(dāng)重要。但目前尚缺乏系統(tǒng)、有效的型特異性引物設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)與評估體系,所以改良現(xiàn)有型特異性引物設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)以及評估體系,明確分型系統(tǒng)的適用地域,建立一套靈敏、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟、國內(nèi)適用的改良HBV型特異性引物PCR基因分型體系對于國內(nèi)HBV基因型的相關(guān)研究具有重要意義。 目的:本研究旨在改進現(xiàn)有型特異性引物PCR基因分型
4、法的引物設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)與方法評估體系,明確方法的適用地域,建立一種靈敏、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟、國內(nèi)適用的改良HBV型特異性引物PCR基因分型法。 方法: 1、改良HBV B、C基因型型特異性引物PCR分型法的建立:自GeneBank數(shù)據(jù)庫中收集已明確基因型的HBV全基因組標(biāo)準(zhǔn)序列,設(shè)立型特異性堿基相關(guān)的定義與判斷標(biāo)準(zhǔn),利用DNAman軟件對標(biāo)準(zhǔn)序列進行比對,得到各型HBV S 基因上的所有型特異性堿基,尋找型特異性堿基聚集區(qū),在聚
5、集區(qū)上設(shè)計型特異性引物,利用標(biāo)準(zhǔn)B、C基因型HBV血清作為陽性模板初步建立B、C基因型HBV型特異性引物PCR基因分型法。開展方法學(xué)評價實驗,包括PCR反應(yīng)條件優(yōu)化、靈敏度實驗、重復(fù)性實驗和特異性實驗。利用22例臨床樣品,將該法與HBV基因分型“金標(biāo)準(zhǔn)”方法測序分型法進行方法比對,同時利用血清樣品測序結(jié)果對本法進行方法學(xué)設(shè)計評估。 2、兩套HBV型特異性引物分型體系的比較:依據(jù)參考文獻提供的型特異性分型引物建立經(jīng)典型特異性引物P
6、CR基因分型法(以下簡稱“經(jīng)典法”)。利用22例臨床樣品,將經(jīng)典法與改良型特異性引物PCR基因分型法(以下簡稱“改良法”)進行方法學(xué)設(shè)計和性能的比對。 3、改良HBV型特異性引物PCR基因分型法的初步應(yīng)用:利用改良型特異性引物:PCR基因分型法對187例廣東省內(nèi)HBV DNA陽性的慢性乙型肝炎病人血清進行分型檢測。 結(jié)果: 1、利用B基因型HBV S基因上的型特異性堿基(nt321 A,nt324T,nt330
7、G)和C基因型HBV S基因上的型特異性堿基(nt293 A,nt294C,nt300 C)成功建立了改良HBV B、C基因型特異性引物PCR分型法。檢測比對血清盤,改良法與測序分型法的檢測符合率為100%。國內(nèi)B基因型HBV S 基因上型特異性堿基的分布情況和堿基特異性指標(biāo)與由收集的標(biāo)準(zhǔn)序列分析得到的B基因型特異性堿基分布情況和堿基特異性指標(biāo)存在顯著性差異(P≤0.05),而C基因型無顯著性差異(P≥0.05)。 2、檢測比對
8、血清盤,改良法與對照法的結(jié)果符合率為86%。 3、收集自廣東省的187份慢性乙型肝炎病人血清中,改良法成功分型185例、2例擴增未檢出。185例已分型樣品中B型107例(57.2%)、C型70例(37.4%)、BC混合型8例(4.3%)。 結(jié)論: 本研究成功建立了一種改良HBV型特異性引物PCR基因分型方法,其具有靈敏、準(zhǔn)確、快速、經(jīng)濟、國內(nèi)適用等特點。本改良方法并被初步應(yīng)用于廣東省內(nèi)HBV基因型流行情況的調(diào)查。
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 等位基因特異性PCR檢測HBV P基因區(qū)YMDD變異.pdf
- 應(yīng)用引物特異性實時熒光PCR法檢測HBVYMDD自然變異的研究.pdf
- 副豬嗜血桿菌種特異性基因的篩選及PCR診斷方法的建立.pdf
- 兩種硅酸鹽細菌特異性PCR方法的建立及應(yīng)用.pdf
- 特異性PCR在檢測玉米ae基因中的應(yīng)用.pdf
- A型口蹄疫病毒黏膜特異性sIgA抗體ELISA檢測方法的建立與應(yīng)用.pdf
- APC基因甲基化特異性PCR檢測方法的建立及其在肺癌診斷中的應(yīng)用.pdf
- 建立等位基因特異性鎖核酸實時熒光定量PCR檢測HBV YIDD耐藥突變及其臨床應(yīng)用評價.pdf
- 沙門氏菌屬特異性靶點基因的篩選與PCR檢測方法的建立.pdf
- 豬傳染性胸膜肺炎型特異性間接ELISA的建立與應(yīng)用.pdf
- 用于診斷孢子絲菌病的特異性探針和引物的篩選及孢子絲菌基因分型的比較.pdf
- 戊型肝炎病毒通用性PCR引物的設(shè)計及其基因分型的研究.pdf
- HBV cccDNA特異性定量檢測方法篩選優(yōu)化及應(yīng)用研究.pdf
- 可溶型SRA對慢性HBV感染特異性CTL應(yīng)答的調(diào)節(jié)作用.pdf
- 等位基因特異性PCR檢測HIV-1 CRF_01AE亞型耐藥突變方法的建立.pdf
- 基于SNP分型的熒光定量PCR檢測系列特異嵌合體方法的建立.pdf
- 中國株乙型肝炎病毒D基因型全序列分析-HBV基因型分型方法學(xué)建立及初步應(yīng)用.pdf
- 福氏志賀菌血清型多重PCR分型方法的建立及應(yīng)用.pdf
- A型流感病毒型特異性單鏈抗體、核酸疫苗的制備及快速檢測方法的建立研究.pdf
- 引物設(shè)計及其在EGFR基因分型中的應(yīng)用.pdf
評論
0/150
提交評論