X射線宮內(nèi)照射誘導(dǎo)結(jié)節(jié)性硬化大白鼠模型特點(diǎn).pdf

1、目的:探討X射線宮內(nèi)照射誘導(dǎo)模擬的結(jié)節(jié)性硬化大白鼠動(dòng)物模型的腦、心臟、腎臟、皮膚、眼睛、肺、牙齒等主要病理特征，為進(jìn)一步研究結(jié)節(jié)性硬化的發(fā)病機(jī)制及致癇機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　方法:①將8只健康妊娠17天的SD大鼠隨機(jī)平均分為4組，即正常對(duì)照孕鼠組（2只）、接受劑量為175cGy的X射線照射組（175cGy孕鼠組，2只）、195cGy孕鼠組（2只）、215cGy孕鼠組（2只）。各孕鼠組所產(chǎn)仔鼠一代（F1代）飼養(yǎng)成年后作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象;②行為

2、學(xué)觀察法:成年當(dāng)日（年齡=2月）即開始用視頻監(jiān)控在自然光線下進(jìn)行24小時(shí)動(dòng)態(tài)錄像，持續(xù)時(shí)間為30天，觀察活動(dòng)、攝食、飲水、晝夜節(jié)律等情況，著重了解有無自發(fā)性癲癇發(fā)作;③水迷宮實(shí)驗(yàn)法:分別利用定位航行、空間探索及可視平臺(tái)的實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力;④腦電圖檢測(cè):利用電極針行腦雙側(cè)額、頂葉皮質(zhì)，海馬區(qū)腦電圖監(jiān)測(cè)，均在大鼠麻醉狀況下進(jìn)行;⑤所有實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)終止后均進(jìn)行心臟灌流固定，觀察大白鼠皮膚、口腔、牙齒及甲周有無異常，獲取大白鼠

3、腦、心、腎、肺、眼睛的大體標(biāo)本，進(jìn)行數(shù)碼相機(jī)采圖，對(duì)腦組織進(jìn)行體積測(cè)定、稱重，腦前后徑、左右徑及上下徑測(cè)量，測(cè)量結(jié)束后對(duì)腦分別進(jìn)行冰凍及石蠟切片，行Nissl染色和HE染色，除腦外的其他臟器均行石蠟切片、HE染色。
　　結(jié)果:①行為學(xué)觀察:正常對(duì)照組無自發(fā)性癲癇發(fā)作，模型組夜間活動(dòng)均較正常對(duì)照組增多，表現(xiàn)為洗臉樣動(dòng)作、舔毛、搔癢、打架、追逐活動(dòng)頻繁，觀察時(shí)間內(nèi)模型組大鼠共發(fā)現(xiàn)3只達(dá)Racine分級(jí)3級(jí)以上的自發(fā)性癲癇發(fā)作，發(fā)生率為

4、16.7％。②水迷宮實(shí)驗(yàn):模型組大鼠逃避潛伏期均明顯長(zhǎng)于正常對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）;隨著訓(xùn)練次數(shù)的增多，各實(shí)驗(yàn)組逃避潛伏期均逐漸縮短，但模型組仍長(zhǎng)于正常對(duì)照組;模型組目標(biāo)象限時(shí)間百分比及穿越平臺(tái)次數(shù)明顯差于正常對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組組間比較無差異。③腦電圖:3.5％水合氯醛麻醉狀態(tài)下，模型組額葉、頂葉皮質(zhì)及海馬處均可發(fā)現(xiàn)頻發(fā)的癇樣放電，且雙側(cè)均出現(xiàn)。正常組可見極少量的癇樣放電，總癇樣放電發(fā)生率中位數(shù)為

5、0.9次/min，175cGy組總癇樣放電發(fā)生率中位數(shù)為8.3次/min，195cGy組為15.5次/min，215cGy組為12.1次/min。各模型組與正常對(duì)照組總癇樣放電發(fā)生率比較P＜0.01，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，模型組組間比較差異亦存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。④大體標(biāo)本及多系統(tǒng)病理學(xué)觀察:各實(shí)驗(yàn)組未見皮膚、甲周、牙齒異常，215cGy組中有1例發(fā)現(xiàn)一側(cè)腎臟體積明顯增大，免疫組織化學(xué)證實(shí)為腎母細(xì)胞瘤，余實(shí)驗(yàn)組未見結(jié)節(jié)性硬化的多系統(tǒng)腫瘤表現(xiàn)。模型

6、組大鼠腦體積變?。ㄖ饕憩F(xiàn)為前后徑縮短明顯），重量變輕，四疊體暴露;冠狀面可見胼胝體部分或者完全缺失，腦皮質(zhì)變薄，各腦室系統(tǒng)擴(kuò)大，側(cè)腦室擴(kuò)大明顯。腦Nissl染色示模型組腦皮層異常，皮層變薄、各層次分界模糊、皮質(zhì)內(nèi)及皮質(zhì)下異位結(jié)節(jié);海馬結(jié)構(gòu)異常，表現(xiàn)為CA1、CA2、CA3區(qū)神經(jīng)元排列分散，CA1區(qū)常出現(xiàn)結(jié)節(jié);室管膜下結(jié)節(jié)、胼胝體缺失，腦室擴(kuò)大。腦HE染色示模型組大鼠腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)異常，分子層及Ⅱ～Ⅲ層內(nèi)均可見多發(fā)的結(jié)節(jié);皮層下結(jié)節(jié);海馬區(qū)

7、結(jié)節(jié)，多發(fā)生于CA1區(qū)，結(jié)節(jié)內(nèi)細(xì)胞排列紊亂，樹突、軸突極性紊亂，可見部分神經(jīng)元固縮、巨大神經(jīng)元、不成熟神經(jīng)元。
　　結(jié)論:(1)X射線宮內(nèi)照射孕17d大鼠能較好的模擬結(jié)節(jié)性硬化的腦皮質(zhì)結(jié)構(gòu)異常、室管膜下結(jié)節(jié)、癲癇發(fā)作及智能障礙，但尚未發(fā)現(xiàn)模擬除神經(jīng)系統(tǒng)以外的臟器損害。(2)隨著照射劑量的增加，腦組織的損害程度逐漸加重，智能障礙明顯，但腦癇性放電并未增加。(3)該模型制作簡(jiǎn)單，死亡率低，成功率高、易于操作，為進(jìn)一步研究其發(fā)病機(jī)制和致