三氧化二砷聯合5-FU對小鼠肝癌H-,22-細胞株及移植瘤作用的實驗研究.pdf

1、目的：探討三氧化二砷(AS2O3)聯合5-氟尿嘧啶(5-FU)對小鼠肝癌H22細胞株抑制作用及皮下移植瘤的影響作用，為提高治療肝癌的臨床效果、降低毒性和克服耐藥提供理論和實驗依據。 方法： 實驗Ⅰ：體外AS2O3聯合5-FU對小鼠肝癌H22細胞株增殖、細胞凋亡的影響： 1.MTT法檢測藥物對細胞生長的影響分別以不同濃度的AS2O3(終濃度為0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)、5-FU(終濃度為

2、20mg/L)和以上各濃度AS2O3聯合5-FU體外作用于小鼠肝癌H22細胞24h、48h、72h后，觀察其對小鼠肝癌H22細胞增殖的影響，并計算細胞生長抑制率和兩藥物相互作用系數(CDI)： 2.TUNEL熒光染色法檢測細胞凋亡情況單用AS2O3或5-FU，或不同濃度AS2O3(0.5μg/mL、1.0μg/mL、2.0μg/mL)聯合5-FU(20mg/L)作用于小鼠肝癌H22細胞24h、48h、72h后，熒光顯微鏡下觀察各

3、組細胞凋亡的情況并計算凋亡率； 實驗Ⅱ：體內AS2O3聯合5-FU治療小鼠肝癌皮下移植瘤的初步研究： 1.成功建立昆明小鼠肝癌皮下移植瘤動物模型40只。按瘤體體積均衡的分為4組進行藥物干預，依次為對照組(NS)、AS2O3組(AS2O30.2mg/kg)，5-FU組(10mg/kg)，AS2O3(0.2mg/kg)+5-FU(10mg/kg)組，每組10只，連續(xù)腹腔注射藥物2周，停藥后第二天處死動物，留取血液標本，解剖提

4、取腫瘤標本。 2.分別測定比較各組小鼠腫瘤體積、HE染色觀察腫瘤組織病理變化、增殖細胞核抗原(PCNA)測定和采用原位末端標記法(TUNEL法)觀察腫瘤細胞凋亡情況、計算凋亡率，小鼠肝腎功能相關生化指標檢測。 結果： 實驗Ⅰ：體外AS2O3或5-FU單藥對小鼠肝癌H22細胞有顯著抑制增殖及誘導凋亡的作用，并呈一定的時間、濃度相關性。AS2O3聯合5-FU后，對小鼠肝癌H22細胞的抑制增殖及誘導凋亡作用較同時間內相

5、應單藥組效果明顯提高。計算兩藥相互作用系數(coefficientofdrugininteraction，CDI)值，各濃度AS2O3與5-Fu聯合作用H22細胞24h和48h時，均為CDI＜1，作用72h時，均為CDI=1，說明兩者在48h內具有協同作用，72h時為相加作用。 實驗Ⅱ：各組腫瘤體積有明顯差異(F=252.7，P＜0.01)，各藥物干預組平均腫瘤體積均明顯低于對照組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，同時AS2O3+

6、5-FU組平均腫瘤體積顯著低于單用AS2O3和5-FU組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)，單用或聯合AS2O3和5-FU后腫瘤體積縮小率分別為32.93％，64.56％和77.06％。AS2O3組細胞增殖指數顯著低于對照組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，AS2O3+5-FU組細胞增殖指數顯著低于對照組和AS2O3組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，雖低于5-FU組，但無顯著差異(P＞0.05)；AS2O3組細胞凋亡率高于對照組，有統(tǒng)計學意義

7、(P＜0.05)，AS2O3+5-FU組細胞凋亡率顯著高于AS2O3組和5-FU組，有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，血清ALT、AST、Cr檢測值治療組均較對照組高，但無顯著差異(P＞0.05)。 結論： 1.體外AS2O3和5-FU對小鼠肝癌H22細胞有明顯地抑制增殖和誘導凋亡作用，并且呈時間和劑量相關性；聯合應用后較相應單藥組效果明顯增強，在48h內兩者具有協同作用，72h時兩者作用相加。 2.體內AS2O3和