氨氯地平聯(lián)合5-fu對小鼠肝癌H22體內(nèi)體外作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、近年來，鈣通道阻滯劑（CCB）與化療藥物聯(lián)合應(yīng)用的研究日益增多。大量的研究表明，抗癌藥物與CCB聯(lián)合可以增強(qiáng)抗癌藥物對多系統(tǒng)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，對多藥耐藥腫瘤細(xì)胞可致耐藥逆轉(zhuǎn)。我們前期的研究表明，與其他的鈣通道阻滯劑相比氨氯地平具有良好的抗腫瘤細(xì)胞增殖的潛能。本研究采用體外細(xì)胞培養(yǎng)法與體內(nèi)移植性腫瘤觀察氨氯地平與5-Fu聯(lián)合應(yīng)用對小鼠肝癌H22的作用，以期將氨氯地平作為一種化療增敏劑用于肝癌的臨床治療。 目的：初步研究氨氯地平

2、（amlodipine）聯(lián)合5-Fu對小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株H22的聯(lián)合抑制效應(yīng)以及兩藥對小鼠H22肝癌腹水瘤及實(shí)體瘤的抑瘤效應(yīng)。 方法：采用小鼠腹水型肝癌細(xì)胞株H22，經(jīng)氨氯地平（3.125～50μmol/L）及5-Fu（12.5～200μg/mL）單獨(dú)及聯(lián)合作用24、48、72小時后，采用MTT法檢測藥物對H22細(xì)胞生長的抑制作用，計(jì)算兩藥的中效濃度（IC50）及合用指數(shù)CI；流式細(xì)胞儀（FCM）檢測藥物單獨(dú)及聯(lián)合作用18h后

3、的凋亡情況以及藥物作用48h后的細(xì)胞周期分布；免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測藥物單獨(dú)及聯(lián)合作用48h后H22細(xì)胞Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。將昆明種小鼠右腋皮下及腹腔接種H22肝癌細(xì)胞建立小鼠移植腫瘤模型后，隨機(jī)將小鼠分為四組：生理鹽水組（對照組），氨氯地平組（10mg·10g-1·d-1），5-Fu組（第3，6，9天腹腔注射5-Fu溶液，10mg·10g-1·d-1）和氨氯地平+5-Fu組（氨氯地平灌胃給藥10mg·10g-1·d-1，第3，6

4、，9天腹腔注射5-Fu溶液，10mg·10g-1·d-1），連續(xù)10d，觀察移植瘤體重量、腹水瘤小鼠生存時間，計(jì)算抑瘤率以及生命延長率。 結(jié)果： （1）氨氯地平、5-Fu單獨(dú)及聯(lián)合作用對小鼠肝癌細(xì)胞的生長均有顯著的增殖抑制作用，并呈明顯的劑量和時間依賴性；兩藥聯(lián)合應(yīng)用時，當(dāng)藥物效應(yīng)（抑制率）小于95％時，具有協(xié)同作用（CI<1）。 （2）流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示氨氯地平、5-Fu單獨(dú)及聯(lián)合作用均可誘導(dǎo)H22細(xì)胞凋亡，

5、與對照組比較，各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞凋亡率明顯增加，合用組與單用組比較，凋亡率明顯增加。 （3）流式細(xì)胞檢測結(jié)果顯示氨氯地平單獨(dú)作用能阻滯H22細(xì)胞于G0/G1期，5-Fu單獨(dú)作用可阻滯H22細(xì)胞于S期，兩藥聯(lián)用能阻滯H22細(xì)胞于G0/G1期和S期。 （4）氨氯地平，5-Fu均能下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)Bax的表達(dá)，聯(lián)合作用對Bcl-2、Bax的表達(dá)影響更明顯。 （5）氨氯地平組，5-Fu組和氨氯地平+5-Fu組對H22

6、小鼠肝癌實(shí)體瘤抑瘤率分別為35.98％，67.95％，80.68％；對H22肝癌腹水瘤小鼠生命延長率分別為19.94％，24.08％，43.11％。 結(jié)論： （1）氨氯地平與5-Fu均可抑制小鼠肝癌H22細(xì)胞的增殖，當(dāng)兩藥合用時能顯著增加單藥對H22細(xì)胞的抑制作用，提示兩藥聯(lián)合應(yīng)用對抑制H22細(xì)胞生長有較好的協(xié)同作用。 （2）5-Fu單獨(dú)作用可阻滯H22細(xì)胞于S期；氨氯地平阻滯H22細(xì)胞周期于G1期；兩藥合用通過