地塞米松對小鼠H22肝癌的作用研究.pdf

1、研究背景：
　　原發(fā)性肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC），是惡性腫瘤，生存期很短，且發(fā)病率仍在逐年遞增，我國肝癌患者占世界肝癌病例的一半。糖皮質(zhì)激素（glucocorticoid,GC）是臨床常用的藥物之一，并常作為化療方案中的必要組成。有意思的是，關于糖皮質(zhì)激素在腫瘤治療中的作用，評價卻眾口不一。一般認為，糖皮質(zhì)激素可改善腫瘤患者化療中的多種毒副作用，提高患者對化療的耐受度。吊詭的是，患者對化療耐受

2、性的提高，往往也意味著腫瘤細胞對化療耐藥性的升高。并且，糖皮質(zhì)激素具有很強的免疫抑制作用。傳統(tǒng)的觀念認為，免疫系統(tǒng)是機體抑制腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的重要屏障，糖皮質(zhì)激素的應用不可避免的將抑制機體的免疫效應，消弱免疫系統(tǒng)的這些抗腫瘤的免疫編輯（Immunoediting）作用。不少研究者發(fā)現(xiàn)，糖皮質(zhì)激素具有誘導血液腫瘤細胞凋亡的作用，但對實體瘤細胞的凋亡卻有抑制作用，從而影響化療的效果，據(jù)此建議再化療時不用糖皮質(zhì)激素藥物。
　　免疫反

3、應、炎癥與腫瘤之間的關系非常錯綜。與多數(shù)人的觀點相反，腫瘤免疫的發(fā)現(xiàn)者Prehn教授長期以來堅持免疫反應促進腫瘤的發(fā)展，因而建議通過抑制免疫治療腫瘤。從病理學的角度看，免疫反應在組織形態(tài)學上就是炎癥反應。而炎癥對腫瘤的發(fā)生和發(fā)展的促進作用是舉世公認的。有意思的是，上述貌似截然相反的觀點在生物相對論的原則下得到了統(tǒng)一。
　　生物相對論認為，生物的壽命與繁殖力呈反向關系。免疫反應對腫瘤細胞具有殺傷作用，使腫瘤細胞的平均生存縮短。在免疫

4、/炎癥和其它環(huán)境應激因素的選擇壓力下，腫瘤細胞必須通過不斷繁殖來保證生存。這種微進化的結果就是，壓力越大，腫瘤細胞的生存期越短，其繁殖力越強，惡性度越高，而患者的生存期越短。
　　從生物相對論的原則出發(fā)，我們推測，糖皮質(zhì)激素或可通過抑制腫瘤細胞的凋亡，抑制腫瘤細胞的分裂增殖，并減少其向其他器官轉(zhuǎn)移的壓力，從而使患者的生存受益。我們用小鼠的肝癌模型進行了初步研究。
　　小鼠Hepa22肝癌模型屬于同種移植模型，引進我國五十多年

5、來，已經(jīng)廣泛地應用于腫瘤的基礎研究。本研究應用小鼠H22腹水型及皮下移植型肝癌模型，觀察地塞米松這一臨床常用的糖皮質(zhì)激素對H22肝癌的生長、荷瘤小鼠的生存狀態(tài)及生存期的影響，并進一步進行地塞米松與化療藥的作用比較，探討化療藥對小鼠H22肝癌的影響。利用小鼠來研究其小鼠肝癌，通過延長小鼠的代瘤生存期，為地塞米松治療腫瘤、延長帶瘤生存提供相關的依據(jù)，并為減少細胞凋亡而抑制腫瘤生長的觀點提供直接的實驗證據(jù)。
　　目的：
　　通過建

6、立小鼠H22腹水型肝癌模型，觀察地塞米松和5-FU對小鼠生存期及腹水量的影響。通過建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型，觀察地塞米松和5-FU對小鼠抑瘤率及生存期的影響。并進一步通過流式細胞儀和Realtime-PCR，分析地塞米松對H22腫瘤的細胞凋亡、細胞周期、糖皮質(zhì)激素受體的表達的影響。
　　方法：
　　1.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，抽取腹水細胞提總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄，PCR擴增并進行瓊脂糖凝膠電泳，檢測腹水型H22腫瘤

7、細胞中是否存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　2.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，選定地塞米松的最佳劑量。
　　3.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，檢測地塞米松對腹水瘤的影響。
　　4.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，進行地塞米松不同用藥天數(shù)的效果比較。
　　5.建立小鼠 H22腹水型肝癌模型，抽取兩組小鼠腹水細胞提總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄并進行Realtime-PCR，檢測使用DEX后，H22腹水細胞中的GCR是上調(diào)，還是下調(diào)。

8、r>　　6.建立小鼠H22腹水型肝癌模型，進行5-FU和地塞米松的效果比較。
　　7.流式細胞儀檢測DEX與對照組小鼠腹水細胞凋亡情況及細胞周期分布。
　　8.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型，提取瘤塊總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄，PCR擴增并進行瓊脂糖凝膠電泳，檢測皮下移植型瘤塊中是否存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　9.建立小鼠H22皮下移植型肝癌模型，觀察地塞米松和5-FU對移植瘤抑瘤率的影響。
　　10.建立小鼠 H22皮

9、下移植型肝癌模型，提取瘤塊總RNA，做逆轉(zhuǎn)錄并進行Realtime-PCR，檢測使用DEX后，皮下移植型瘤塊中的GCR是上調(diào)，還是下調(diào)。
　　結果：
　　1.小鼠H22腹水型肝癌的腹水細胞中存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　2.10mg/kg劑量組小鼠的生存期比5mg/kg、1mg/kg、0.5mg/kg劑量組小鼠的生存期長，腹水量比5mg/kg及0.5mg/kg劑量組小鼠的腹水量少。
　　3.地塞米松組小鼠的生存期比生

10、理鹽水組小鼠的長，且腹水量少。
　　4.從第5、6天開始給藥比從第7、8天開始給藥的生存期長，腹水量少。
　　5.使用地塞米松后，H22腹水細胞中糖皮質(zhì)激素受體的表達降低。
　　6. H22腹水型肝癌，地塞米松組和生理鹽水組小鼠的生存期比5-FU組和5-FU+DEX組小鼠的生存期長，但是腹水量多。
　　7.使用地塞米松后，細胞凋亡比例減少，處于分裂周期的細胞比例下降。
　　8.小鼠H22皮下移植型肝癌的瘤塊

11、中存在糖皮質(zhì)激素受體。
　　9.H22皮下移植型肝癌，地塞米松組和生理鹽水組小鼠的生存期均比5-FU組和5-FU+DEX組小鼠的生存期長，但是瘤塊大。
　　10.使用地塞米松后，H22移植瘤塊中糖皮質(zhì)激素受體的表達降低。
　　結論：
　　1.小鼠H22腹水型及移植型肝癌模型的建立非常成功。
　　2.地塞米松可以抑制H22腹水細胞凋亡，使處于靜止期的細胞比例增多，處于分裂增殖期的細胞比例減少。并且，可以下調(diào)H

12、22腫瘤細胞中糖皮質(zhì)激素受體的表達。
　　3.地塞米松對小鼠H22肝癌腹水型腫瘤的生存期有明顯的延長作用，且早期用藥較晚期用藥效果好。與鹽水組小鼠腫瘤相比，地塞米松組腹水量少，生存狀態(tài)較好。然而，化療藥雖然可以有效抑制腫瘤的生長，但對H22腹水型肝癌小鼠的生存期無作用，甚至會使其生存期縮短。
　　4.化療藥對小鼠H22肝癌皮下移植瘤有明顯的抑制作用，但也會致使小鼠死亡。地塞米松對小鼠H22肝癌移植瘤雖然無明顯的抑制作用，但小