供者淋巴細(xì)胞輸注治療小鼠H-,22-肝癌皮下移植瘤的實(shí)驗研究.pdf

1、目的探討供者淋巴細(xì)胞輸注(DLI)及其聯(lián)合化療(氟尿嘧啶,5-FU)對小鼠H22肝癌皮下移植瘤的治療作用。 方法昆明(KM)小鼠隨機(jī)分為A、B、C、D四組，右腋下接種H22肝癌細(xì)胞建立皮下移植瘤模型。其中C、D組以BALB/C小鼠為供鼠，接種瘤細(xì)胞前先行預(yù)處理，預(yù)處理方案為DST+CP+DST：每只KM小鼠d0經(jīng)尾靜脈注入5×107供鼠脾細(xì)胞(供者特異性輸注,DST)，d2腹腔注射環(huán)磷酰胺(CP)200mg/kg，d3再次尾靜脈

2、注射供鼠脾細(xì)胞3×107。 A組(荷瘤對照組)：接種瘤細(xì)胞后不予任何特殊處理； B組(化療組)：接種后第3天開始化療，5-FU20mg·kg-1·d-1腹腔注射，連續(xù)用藥5天； C組(DLI組)：d0開始預(yù)處理，d11接種瘤細(xì)胞，d14、d21、d28尾靜脈注射供鼠脾臟淋巴細(xì)胞，細(xì)胞數(shù)分別為0.5×107/只、0.5×107/只、1×107/只； D組(聯(lián)合組)：d0開始預(yù)處理，d4接種瘤細(xì)胞，d7～11

3、化療，方案同B組，d14、d21、d28行DLI，細(xì)胞數(shù)同C組。 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測C、D組免疫耐受狀態(tài)；比較各組小鼠生存期、抑瘤率、瘤體病理；流式細(xì)胞儀(FCM)檢測各組小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群；ELISA檢測各組小鼠血清IL-2水平；免疫組織化學(xué)法觀察正常BALB/C小鼠脾臟CD34+造血干細(xì)胞。 結(jié)果 1.C、D組KM小鼠脾細(xì)胞對BALB/C小鼠脾細(xì)胞的MLR反應(yīng)性明顯降低； 2.A、B

4、、C、D組生存時間分別為(16.4±2.5)d、(26.3±3.1)d、(23.3±3.2)d和(33.7±5.3)d，B、C組生存時間長于A組(P＜0.01)，D組長于其余三組(P＜0.01)； 3.B、C、D各組抑瘤率分別為61.3％、34.7％和89.5％；4.C、D兩組小鼠外周血CD3+、CD4+T細(xì)胞百分比較A、B組增多(P＜0.05)，CD4+/CD8+比值及IL-2水平明顯高于A、B組(P＜0.05)； 5

5、.瘤體組織病理學(xué)觀察見C、D組間質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞浸潤； 6.正常BALB/C小鼠脾臟脾小體周邊可見少量成簇狀分布的CD34+造血干細(xì)胞。 結(jié)論 1.DST+CP+DST方法可以在KM小鼠誘導(dǎo)出對BALB/C小鼠的特異性免疫耐受狀態(tài)。 2.DLI與化療具有協(xié)同作用，兩者聯(lián)合應(yīng)用可以明顯抑制小鼠H22肝癌皮下移植瘤瘤體生長、延長小鼠的生存時間。 3.DLI可以增強(qiáng)H22肝癌皮下移植瘤小鼠機(jī)體的免疫功能