黃芪桂枝五物湯對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠免疫炎癥因子的影響.pdf

1、多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一種神經(jīng)中樞系統(tǒng)(Central nervoussystem，CNS)的自身免疫性疾病，主要病理改變?yōu)橹袠猩窠?jīng)系統(tǒng)白質(zhì)的脫髓鞘病變。該病發(fā)病率高，致殘率高，病程漫長。據(jù)不完全統(tǒng)計，多發(fā)性硬化癥的患病人數(shù)在世界人口約250萬。中國目前沒有準確的流行病學(xué)調(diào)查，但相關(guān)的文獻和案例報告，多發(fā)性硬化癥的發(fā)病人數(shù)在我國也逐年上升。目前臨床上西醫(yī)對MS的治療方案雖已得到共識，但仍無特效治療，臨

2、床療效不滿意，復(fù)發(fā)率、致殘率均高。近年來的實踐證明，中醫(yī)藥能有效改善神經(jīng)癥狀，緩解復(fù)發(fā)癥狀，減少發(fā)作次數(shù)，彌補西醫(yī)的不足。
　　目的:
　　本實驗通過比較研究的方法，觀察黃芪桂枝五物湯對實驗性自身免疫性腦脊髓炎大鼠基本情況、臨床癥狀、病理變化、免疫炎性調(diào)節(jié)等方面的影響效果，從而探討黃芪桂枝五物湯在多發(fā)性硬化中的免疫治療機制及療效，為多發(fā)性硬化臨床治療進一步提供實驗研究證據(jù)。
　　方法:
　　1.按隨機原則把32只

3、SPF級6-8周齡Wistar雌性大鼠分成正常組、模型組、西藥組、中藥組4組，每組分別8只。
　　2.選用二次免疫法進行造模。
　　3.在第1天造模的同時給予灌胃藥物。研究16天期間，各組大鼠每間隔24小時連續(xù)16天給予灌胃。其中正常組大鼠給予正常生理鹽水（2ml/只）灌服;模型組大鼠給予正常生理鹽水（2ml/只）灌服;西藥組大鼠給予醋酸潑尼松(1mg/kg)灌服;中藥組大鼠給予黃芪桂枝五物湯煎劑(11.88g/kg)灌服。

4、同時每間隔24小時連續(xù)16天觀察各組大鼠的精神狀態(tài)、飲水量、進食、體重、排泄量等情況，同時進行神經(jīng)功能評分。
　　4.各組大鼠于第17天采用過度麻醉方法處死，并收集外周血和腦組織，進行組織病理、ELISA檢測IL-33及IL-35的含量、QPCR檢查TLR4的表達。
　　結(jié)果:
　　1.正常組未出現(xiàn)臨床損害癥狀。模型組8只大鼠于造模第2天后陸續(xù)發(fā)病，第3天逐漸出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀，第11天達到發(fā)病高峰，發(fā)病比為8/8，

5、死亡比為1/8。西藥組8只大鼠于造模第2天后逐漸發(fā)病，第3天開始出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀，第12天達到發(fā)病高峰，發(fā)病比為8/8，死亡比為0/8。中藥組8只大鼠于造模第2天后逐漸發(fā)病，第4天開始出現(xiàn)神經(jīng)功能損害癥狀，第14天達到發(fā)病高峰，發(fā)病比8/8，死亡比1/8。
　　2.治療后各組臨床癥狀神經(jīng)功能評分比較，正常組無癥狀，模型組評分最高。西藥組低于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組神經(jīng)功能評分低于西藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義

6、(P＜0.05)。
　　3.治療后各組潛伏期比較，模型組潛伏期最短，發(fā)病最快，中藥組潛伏期最長，發(fā)病時間最慢。西藥組潛伏期長于模型組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）;中藥組潛伏期長于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);中藥組潛伏期長于西藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　4.治療后各組癥狀達高峰時間比較，模型組最短。西藥組、中藥組均長于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);中藥組長于西藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)

7、意義(P＜0.05)。
　　5.各組大鼠造模當(dāng)天體重差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。造模后第11天、第16天各組大鼠體重比較，正常組最重，模型組及西藥組最輕。模型組、西藥組、中藥組均輕于正常組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組重于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);中藥組重于西藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);西藥組略低于模型組，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　6.HE染色:正常組大鼠腦組織切

8、片未見異常。模型組腦和脊髓切片發(fā)現(xiàn)在白質(zhì)或白灰質(zhì)交界處可見小血管擴張，部分小血管壁增厚，小血管周圍有炎性細胞明顯浸潤，形成血管袖套樣結(jié)構(gòu)，周圍神經(jīng)髓鞘結(jié)構(gòu)腫脹崩解呈碎片樣結(jié)構(gòu)。西藥組、中藥組與模型組對比，“袖套”狀結(jié)構(gòu)均有所減少，血管周圍炎性細胞明顯減輕，白質(zhì)內(nèi)見散在較多炎性細胞浸潤。
　　7.治療后各組IL-33比較，正常組最低，模型組最高。模型組高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組、西藥組低于模型組，差異均有統(tǒng)

9、計學(xué)意義(P＜0.05);中藥組高于西藥組，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　8.治療后各組IL-35比較，正常組最高，模型組最低。模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);西藥組、中藥組均低于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);西藥組高于模型組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）;中藥組高于西藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　9.治療后各組TLR4比較，正常組最低，模型組最高。模型組、西藥

10、組、中藥組均高于正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);西藥組、中藥組均低于模型組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），西藥組低于中藥組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.Wistar大鼠通過二次免疫法成功建立EAE模型;EAE大鼠體重減輕，出現(xiàn)明顯的神經(jīng)系統(tǒng)受損癥狀。
　　2.EAE大鼠潛伏期短，出現(xiàn)臨床癥狀后較快達高峰，中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性細胞浸潤，外周血炎性細胞因子IL-33表達增多，IL-3