HBx羧基端缺失40個氨基酸相關(guān)上調(diào)-下調(diào)基因的篩選和初步功能研究.pdf

1、第二軍醫(yī)人學(xué)博士學(xué)位論文中立摘要HBx羧基端缺失40個氨基酸相關(guān)上調(diào)／下調(diào)基因的篩選和初步功能研究中文摘要慢性乙肝病毒(HBV)感染是肝細(xì)胞癌(HCC)發(fā)生發(fā)展的一個主要危險因素。乙型肝炎病毒x蛋白(HBx)與HBV相關(guān)的HCC形成密切相關(guān)，HBx的自然突變普遍存在于肝癌組織中，HBx突變在HBV相關(guān)的HCC形成過程中可能起著關(guān)鍵性的作用。體外研究表明，轉(zhuǎn)染HBx蛋白羧基端缺失40個氨基酸(HBxg一40)的肝癌細(xì)胞具有明顯的促進(jìn)細(xì)胞增

2、殖和致瘤能力。為進(jìn)一步探討HBx蛋白羧基端缺失40個氨基酸在肝癌發(fā)生中的作用，本研究采用抑制性消減雜交技術(shù)(SSH)結(jié)合基因表達(dá)譜芯片篩選HBx蛋白羧基端缺失40個氨基酸相關(guān)的上調(diào)／下調(diào)基因并對其功能進(jìn)行初步研究。用SSH方法得到了87條基因，其中上調(diào)基因55條，下調(diào)基因32條。用基因表達(dá)譜芯片得到差異表達(dá)基因167條，其中上調(diào)基因145條，下調(diào)基因22條。用生物信息學(xué)分析這些基因的功能及與肝細(xì)胞癌形成的可能關(guān)系。選出三個有意義的基因W

3、nt5a、ETV5和DKFZ，用RT—PCR、實時熒光定量PCR檢測三個基因在肝癌細(xì)胞株、肝癌和癌旁組織中的mRNA表達(dá)情況。結(jié)果表明三個基因在pcDNAHBxg一40轉(zhuǎn)染的Huh7細(xì)胞中的mRNA表達(dá)水平均高于pcDNA—HBx轉(zhuǎn)染的Huh7細(xì)胞：除Wnt5a基因外，在肝癌組織中的mRNA表達(dá)水平高于癌旁組織。推測ETV5、DKFZ兩個基因可能與細(xì)胞的增殖相關(guān)。用免疫組織化學(xué)和Westernblot方法分析Wnt5a、P53、P21”

4、1在肝癌細(xì)胞株、肝癌及癌旁組織中的表達(dá)情況及相互關(guān)系，證實P53和P21”1在肝癌組織的表達(dá)高于癌旁組織，而Wnt5a相反。Wnt5a在pcDNA—HBxZ一40轉(zhuǎn)染的Huh7細(xì)胞株中的表達(dá)高于pcDNA—HBx轉(zhuǎn)染的Huh7細(xì)胞，而P21”“相反。P53在二株細(xì)胞中的表達(dá)沒有顯著差異。Wnt5a的表達(dá)與P53和P21密切相關(guān)，Wnt5a可能與P53和P2l信號分子相互作用并參與了肝細(xì)胞癌的發(fā)生。關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒X蛋白：反式激活：肝