60Coγ射線對(duì)線粒體基因COXⅠ、ATPase6表達(dá)水平的影響.pdf

1、目前，隨著核技術(shù)在科技、醫(yī)療等領(lǐng)域的飛速發(fā)展與應(yīng)用，輻射對(duì)人類(lèi)環(huán)境及健康的影響越來(lái)越受關(guān)注。突發(fā)放射性事故而又沒(méi)有佩戴物理劑量計(jì)時(shí)，生物劑量計(jì)對(duì)于受照人員的劑量估算具有重要作用。染色體畸變分析一直是國(guó)際公認(rèn)的輻射生物劑量估算的金標(biāo)準(zhǔn)，然而其細(xì)胞培養(yǎng)周期較長(zhǎng)，對(duì)工作人員的經(jīng)驗(yàn)水平要求較高。因此，尋找一種便捷、快速的生物劑量計(jì)始終是輻射生物劑量估算領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。線粒體DN A是人體內(nèi)僅有的核外DN A，具有高拷貝數(shù)。因?yàn)槿鄙俳M蛋白和非組蛋

2、白的保護(hù)，與核DN A相比，線粒體 DN A對(duì)氧化損傷更敏感，更容易發(fā)生突變，而且線粒體DN A缺乏有效的修復(fù)系統(tǒng)，因此更容易受到電離輻射的影響。本研究利用分子生物學(xué)手段來(lái)研究電離輻射對(duì)線粒體基因表達(dá)水平的變化，以期獲得一種新型輻射標(biāo)志物，為新型輻射生物劑量計(jì)的研究奠定基礎(chǔ)。
　　目的：
　　研究線粒體基因受照后的表達(dá)變化規(guī)律，以求在線粒體內(nèi)尋找一種新型輻射損傷標(biāo)志物，為新型輻射生物劑量計(jì)的研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：<

3、br>　　1、用不同劑量水平(0~5 Gy)的60Coγ射線照射正常人離體外周血樣本，于照射后2 h，研究線粒體基因ND1、ND6、COXⅠ、COXⅡ、COXⅢ、ATPase6和ATPase8在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化，以求篩選出輻射敏感基因。
　　2、用不同劑量水平(0~3 Gy)的60Coγ射線照射人淋巴細(xì)胞株樣本，于照射后12 h、24 h、48 h、72 h，研究篩選出的線粒體基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)變化，并研究其時(shí)效關(guān)系。

4、　　3、采用不同劑量水平（0-5 Gy）60Coγ射線照射正常人離體外周血，于照射后6h后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)篩選出的線粒體基因的蛋白質(zhì)表達(dá)水平變化。
　　結(jié)果：
　　1、COXⅠ、ATPase6兩個(gè)基因的表達(dá)變化在0-3 Gy范圍內(nèi)隨受照劑量的增加呈持續(xù)上升趨勢(shì)，呈現(xiàn)出較好的劑量響應(yīng)關(guān)系。N D6隨著受照劑量的增加呈下降趨勢(shì)。其他4個(gè)基因的表達(dá)水平基本都是在0-3 Gy范圍內(nèi)先略微下降后持續(xù)上升，3 Gy照射后表達(dá)水平最高。

5、
　　2、量效關(guān)系方面，在60Coγ射線照射人淋巴細(xì)胞株后12 h、48 h、72 h C OXⅠ基因mRNA表達(dá)水平都呈上升趨勢(shì)，具有良好的劑量響應(yīng)關(guān)系。而照射后24 h COXⅠ基因mRN A表達(dá)水平先下降后上升。ATPase6基因的表達(dá)只有在0-0.8 Gy照射后12 h具有規(guī)律性，表達(dá)水平隨受照劑量的增加而上升，具有良好的劑量響應(yīng)關(guān)系。在時(shí)效關(guān)系方面，當(dāng)受照劑量為3 Gy時(shí)，隨著照射后培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，COXⅠ基因表達(dá)水平呈

6、明顯上升趨勢(shì)，時(shí)效關(guān)系非常顯著。而 ATPase6基因表達(dá)水平隨著照后時(shí)間的延長(zhǎng)不具有明顯的時(shí)間響應(yīng)關(guān)系。
　　3、0-5 Gy60Coγ射線照射人外周血淋巴細(xì)胞后，COXⅠ蛋白各劑量組與對(duì)照組相比，只有1 Gy照射后，蛋白質(zhì)表達(dá)水平有顯著性提升。
　　結(jié)論：
　　1、受照后2 h，在轉(zhuǎn)錄水平，COXⅠ和ATPase6兩個(gè)基因在0-3 Gy劑量范圍內(nèi)呈上升趨勢(shì)，呈現(xiàn)出較好的劑量響應(yīng)關(guān)系，可以用于進(jìn)一步研究。