黃連生物堿對線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白表達的影響.pdf

1、糖尿病(diabetes)是由遺傳因素、免疫功能紊亂、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等各種致病因子作用于機體導(dǎo)致胰島功能減退、胰島素抵抗等而引發(fā)的糖、蛋白質(zhì)、脂肪、水和電解質(zhì)等一系列代謝紊亂綜合癥，臨床上以高血糖為主要特點，典型病例可出現(xiàn)多尿、多飲、多食、消瘦等表現(xiàn)，即“三多一少”癥狀，糖尿?。ㄑ牵┮坏┛刂撇缓脮l(fā)并發(fā)癥，導(dǎo)致腎、眼、足等部位的衰竭病變，且無法治愈。目前尚無治療手段能完全治愈該病，僅能靠綜合治療延緩病情發(fā)展

2、，一種是依靠西醫(yī)降糖藥物來治療糖尿病，但長期使用需要逐漸加大藥量，會導(dǎo)致不同程度的不良反應(yīng)，并且不能有效控制并發(fā)癥的出現(xiàn);另一種則是依靠能夠有效降血糖的中藥來治療糖尿病及其并發(fā)癥。長期以來，黃連作為中醫(yī)治療“消渴”病的常用藥物而一直被廣泛應(yīng)用于臨床，其有效成分包括小檗堿、黃連堿、藥根堿、表小檗堿、巴馬汀等?，F(xiàn)代國內(nèi)外有大量文獻報道黃連生物堿能有效治療糖尿病及其并發(fā)癥，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，黃連具有降糖、降脂、抗氧化、抗炎、抑菌、抗腫瘤等多種生物

3、活性。然而黃連降血糖的機制和有效成分尚不明朗，因此，有必要對黃連中降血糖的活性成分做全面、深入的研究。本研究以HepG2細胞為模型，對黃連的降糖活性做全面評價，利用高速逆流色譜(HPLC)對吸收進細胞內(nèi)的黃連生物堿進行檢測，之后利用免疫印記法(Westernblot)檢測各種生物堿對線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白表達的影響。希望能掌握黃連中降血糖的有效成分及其機制，為下一步藥理研究奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究的主要內(nèi)容有:(1)HepG2細胞的

4、培養(yǎng)以及用高效液相色譜法(HPLC)測定細胞中各種黃連生物堿的含量;(2)線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白質(zhì)樣品的制備;(3)以線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白為靶標(biāo)，評價4種黃連生物堿對線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白表達的影響;(4)評價其他黃連堿衍生物對線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白表達的影響。
　　 通過以上實驗得到結(jié)果如下:
　　 (1)用高效液相色譜法檢測在黃連生物堿環(huán)境中培養(yǎng)的HepG2細胞中各種生物堿的含量，并通過公式換算，其結(jié)果如下:小檗堿＞黃連堿＞表小檗

5、堿＞巴馬?。ㄒ耘囵B(yǎng)液中生物堿均濃度為0.51μg/mL為例，四種生物堿濃度分別為1.600、1.080、0.632、0.496μg/mL)，而藥根堿幾乎不被吸收，且培養(yǎng)液中小檗堿和黃連堿的濃度與細胞內(nèi)的生物堿的濃度呈良好的線性關(guān)系(小檗堿:Y=0.3056+2.1572XR2=0.9957;黃連堿Y=0.2935+0.9121XR2=0.973)。
　　 (2)線粒體復(fù)合物Ⅲ蛋白質(zhì)樣品的制備:培養(yǎng)好的細胞用RIPA強裂解液裂解以