黃連生物堿對(duì)HepG2細(xì)胞和金黃地鼠的協(xié)同降膽固醇活性及機(jī)制研究.pdf

1、心血管疾病是世界上的主要致死病因。眾所周知，血脂異常是引發(fā)心血管疾病如冠心病，外周動(dòng)脈疾病的主要危險(xiǎn)因素之一，血脂異常指的是體內(nèi)血清總膽固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白水平（LDL-c）和高密度脂蛋白（HDL-c）水平的一種或者幾種發(fā)生異常。因此，改善血清脂質(zhì)水平可以有效的干擾心血管疾病的進(jìn)程。黃連具有抗菌、抗病毒、抗炎癥、降血糖、降血脂等功效，小檗堿（BBR）、黃連堿（COP）、巴馬?。≒AL）、表小檗堿（EPI）和藥根堿

2、（JAT）是黃連中主要的活性物質(zhì)，它們具有相似的異喹啉結(jié)構(gòu)，并且安全性相對(duì)較高。前期的研究表明這五種生物堿通過不同的分子機(jī)制展現(xiàn)出不同的降膽固醇活性?，F(xiàn)在，針對(duì)治療高血脂癥的聯(lián)合療法被認(rèn)為是一種新的治療方案，它具有降脂作用活性高，用量少，副作用低等優(yōu)勢(shì)。因此，本實(shí)驗(yàn)研究，探索五種黃連生物堿（BBR，COP，PAL，JAT，EPI）對(duì)HepG2細(xì)胞和金黃地鼠的協(xié)同降膽固醇活性和機(jī)制的研究。
　　本實(shí)驗(yàn)研究的主要內(nèi)容和結(jié)果：
　

3、?。?）在對(duì)數(shù)期HepG2細(xì)胞生長狀態(tài)良好的情況下，采用MTT實(shí)驗(yàn)檢測不同濃度的黃連生物堿單體和復(fù)合物（COM）對(duì)細(xì)胞成活率的影響。結(jié)果表明，當(dāng)BBR。COP。PAL。JAT。EPI和 COM的濃度小于等于5μg/ml時(shí)，藥物對(duì)HepG2細(xì)胞成活率的影響很小，細(xì)胞成活率大于80％，沒有明顯毒性，所以，在當(dāng)前實(shí)驗(yàn)條件下，BBR。COP。PAL。JAT。EPI和 COM濃度均選擇5μg/ml作為后續(xù)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)的適宜濃度。
　?。?）采用

4、油紅O染色法和HPLC分析法，探索比較黃連生物堿單體和復(fù)合物對(duì)高膽固醇誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞的脂質(zhì)積累和細(xì)胞內(nèi)膽固醇水平的影響，結(jié)果表明，與生物堿單體組相比，COM能更有效的降低細(xì)胞內(nèi)脂滴的積累和膽固醇水平。
　?。?）初步探究黃連生物堿單體和復(fù)合物對(duì)高膽固醇誘導(dǎo)的Hep G2細(xì)胞中膽固醇代謝關(guān)鍵靶點(diǎn)的影響。利用qRT-PCR，western blot和免疫熒光的方法，檢測HepG2細(xì)胞中參與膽固醇代謝的關(guān)鍵基因LDL recpt

5、or，HMGCR和CYP7A1的表達(dá)。結(jié)果表明，與高膽固醇誘導(dǎo)組（HC）相比，五種生物堿單體和 COM組能不同程度的增加 LDL receptor和CYP7A1的表達(dá)，以及降低HMGCR的表達(dá)，尤其是COM組，與單體生物堿組相比，在調(diào)節(jié)膽固醇關(guān)鍵基因方面具有更明顯的優(yōu)勢(shì)。
　　（4）進(jìn)一步探究比較黃連生物堿單體和復(fù)合物對(duì)金黃地鼠脂質(zhì)水平的影響。檢測金黃地鼠的血清指標(biāo)（TC，TG。LDL-c，HDL-c）以及糞便中的TC和總膽汁酸（

6、TBA）水平，結(jié)果表明，高脂高膽固醇誘導(dǎo)的金黃地鼠（HFHC）血清中 TC，TG和 LDL-c水平增加，HDL-c水平降低。給藥處理后，與HFHC組相比，TC，TG和 LDL-c水平得到顯著的改善，相同劑量下，COM能分別顯著降低 TC28.4%，TG34.7%，LDL-c22.3%，相反，HDL-c水平顯著增加。與單體組相比，COM能更有效的改善血清中的脂質(zhì)水平。此外，與生物堿單體組相比，COM有效增加糞便中TC和TBA的排出。因此，

7、可以得出，當(dāng)五種主要生物堿以一定比例復(fù)配到一起時(shí)，其降膽固醇的活性顯著提升。
　?。?）為了進(jìn)一步探究五種生物堿降膽固醇的協(xié)同效應(yīng)，我們比較了BBR。COP。PAL。JAT，EPI和COM對(duì)金黃地鼠的血清和糞便中脂質(zhì)指標(biāo)的貢獻(xiàn)率（CR）,結(jié)果表明，在改善脂質(zhì)水平方面，黃連生物堿復(fù)合物的貢獻(xiàn)率大于生物堿單獨(dú)使用的貢獻(xiàn)率總和，說明黃連生物堿五種主要單體聯(lián)合使用具有協(xié)同效應(yīng)，能增強(qiáng)降膽固醇的活性。
　　總的來說，黃連生物堿復(fù)合物在