乳清蛋白降膽固醇肽的制備及活性研究.pdf

1、高血脂癥是我國(guó)目前致死率較高的慢性病之一，而現(xiàn)階段治療的主要方法是采用降低血液中膽固醇含量的靶向藥物治療，其中存在治療費(fèi)用高昂、具有較大的毒副作用等缺陷。乳清有較高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，當(dāng)乳清蛋白被蛋白酶水解以后，會(huì)產(chǎn)生許多具有生物活性的序列，經(jīng)過(guò)釋放后，即成為我們所熟知的生物活性肽。但是目前對(duì)于水解乳清蛋白獲得降血壓肽并研究其功效的實(shí)驗(yàn)居多，而對(duì)于更具研究意義的乳清蛋白降膽固醇肽的研究較局限。因此，本試驗(yàn)通過(guò)酶解法對(duì)乳清蛋白(WPC80)進(jìn)行水

2、解，并對(duì)其水解后制備得到的多肽進(jìn)行后續(xù)的降膽固醇的試驗(yàn)研究，對(duì)于開發(fā)新型微生態(tài)制劑與功能性健康食品都有極重要的實(shí)踐意義和理論研究?jī)r(jià)值。本文對(duì)乳清蛋白(WPC80)進(jìn)行蛋白酶水解，利用超濾進(jìn)行濃縮，陰陽(yáng)離子交換樹脂法進(jìn)行脫鹽，并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證，得到經(jīng)處理過(guò)后的多肽具有明顯的降膽固醇活性。
　　本研究主要內(nèi)容包括：⑴以WPC80為原料制備降膽固醇多肽酶解條件的優(yōu)化:以膽固醇膠束溶解度抑制率與水解度為指標(biāo)，通過(guò)單因素試驗(yàn)，并與前人

3、選取的水解乳清蛋白獲得降膽固醇肽的酶類進(jìn)行比較，最終選擇胰蛋白酶與中性蛋白酶雙酶復(fù)合對(duì)乳清蛋白(WPC80)進(jìn)行水解實(shí)驗(yàn)，獲取具有降膽固醇生理活性的多肽;并運(yùn)用響應(yīng)面法分析法，得到了最優(yōu)的水解實(shí)驗(yàn)的各個(gè)參數(shù)水平:底物濃度(S)為7％、加酶量為(E/S)6％、酶量比（胰蛋白酶∶中性蛋白酶）為4∶1，胰蛋白酶與中性蛋白酶作用時(shí)間為8+2h，抑制率最大為19.81％，按照上述條件進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，得到抑制率為19.19％，證明該模型高度有效。⑵超

4、濾濃縮降膽固醇肽的研究:以單位時(shí)間的膜通量為指標(biāo)，確定了超濾實(shí)驗(yàn)的最優(yōu)工藝水平，即在45℃時(shí)調(diào)節(jié)超濾壓力為0.20MPa，向其中加入預(yù)先配制好的濃度為7％的水解肽溶液，進(jìn)行超濾試驗(yàn)。并比較超濾前后水解肽溶液的降膽固醇活性，最終得出經(jīng)過(guò)超濾后的活性肽降膽固醇生物活性由19.83％提升至29.71％，證明超濾對(duì)于分離濃縮乳清蛋白降膽固醇肽并提升其生物活性是一種有效的手段。⑶陰陽(yáng)離子交換樹脂對(duì)降膽固醇肽純化脫鹽的研究:經(jīng)過(guò)單因素試驗(yàn)，以脫鹽率

5、及肽回收率為指標(biāo)，確定了陰陽(yáng)離子實(shí)驗(yàn)的最佳流速分別為:陽(yáng)離子交換樹脂最佳流速9BV/h;陰離子交換樹脂最佳流速11BV/h。按照以上條件對(duì)活性肽溶液進(jìn)行脫鹽處理，得到最終結(jié)果是脫鹽率高達(dá)93.41％，與此同時(shí)肽的回收率也較高達(dá)到了82.55％，并且經(jīng)過(guò)脫鹽處理后活性肽抑制率從超濾濃縮的29.71％提高到47.82％。⑷降膽固醇肽的成分測(cè)定:肽總含量可以達(dá)到82.46％，水分含量是4.68％，灰分含量是0.91％。⑸降膽固醇肽動(dòng)物驗(yàn)證試驗(yàn)