乳清蛋白源降膽固醇活性肽的制備及其生物學功能的研究.pdf

1、本研究選用乳清蛋白為原料蛋白制備具有降血液膽固醇效應的食品蛋白源生物活性肽，以乳清蛋白水解度為參照指標對乳清蛋白在胰蛋白酶和A.S1398中性蛋白酶單一或聯(lián)合作用下的5種酶解方式的酶解條件進行優(yōu)化。在此基礎(chǔ)上，以豬肝臟中HMG-CoA還原酶活性變化的體外檢測作為主要的選擇方法，對產(chǎn)生乳清蛋白源降膽固醇活生物活性肽的酶解方式及酶解條件進行篩選，并對有較高HMG-CoA還原酶抑制活性的乳清蛋白源生物活性肽進行了分離及分子量范圍的定性。選用小

2、白鼠飼養(yǎng)試驗對分離所得的乳清蛋白源活性肽的生物學功能進行評價。 1.為了獲得產(chǎn)生具有較高HMG-CoA還原酶抑制活性乳清蛋白源生物活性肽的酶解方式及酶解條件，首先以中心組合實驗、正交實驗、單因素實驗等實驗設(shè)計方法優(yōu)化了乳清蛋白在5種水解方式下的水解條件，然后測定了每種水解方式下不同水解階段的水解產(chǎn)物體外對HMG-CoA還原酶活性的影響。結(jié)果表明：先加胰蛋白酶后加A.S1398中性蛋白酶聯(lián)合水解乳清蛋白方式中的(8+1)小時階段的

3、水解產(chǎn)物具有相對較高的HMG-CoA還原酶抑制活性，此階段的水解產(chǎn)物在50mg/ml濃度下對HMG-CoA還原酶的抑制率為13.01％。 2.選擇同時具有離子交換與分子篩作用的CM-SephadexC50為層析材料對乳清蛋白源目標活性肽進行分離。洗脫方式采用pH(6.0～8.0)梯度線性洗脫，在三種磷酸鹽緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉)離子強度條件(10mmol/L，30mmol/L、50mmol/L)下，選擇能夠較好分離乳清蛋

4、白源高HMG-CoA還原酶抑制活性乳清蛋白活性肽的操作條件，結(jié)果表明：在以pH(6.0～8.0)梯度方式線性洗脫、30mmol/L離子強度為洗脫條件時，C50CM-Sephadex可將選擇的水解物分離出4個相對較窄的組分峰，其中第4組分峰在50mg/ml濃度下對HMG-CoA還原酶的最高抑制率達17.25％。對分離所得活性肽分子量范圍的定性采用了3％濃縮膠與17.5％分離膠組成的不連續(xù)系統(tǒng)的SDS-PAGE電泳法，電泳結(jié)果表明：具有較高

5、HMG-CoA還原酶抑制活性的第3、4組分中乳清蛋白源活性肽的分子量范圍大至介于2000～12000之間。 3.為了評價分離所得乳清蛋白源活性肽的生物學功能，將40只初始體重差異不顯著(p＞0.05)的昆明雄性小白鼠分成四組。在基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上，各試驗組按照實驗預先設(shè)定進行處理：A組飼喂清水；B組飼喂乳清蛋白溶液；C組飼喂1、2洗脫組分；D組飼喂具較高HMG-CoA還原酶抑制活性的3、4洗脫組分，其中B、C、D三組飼喂添加物中N