SA-mIL15雙功能融合蛋白的制備及其生物學鑒定.pdf

1、白細胞介素15(interleukin-15)是1994年由Grabstein發(fā)現(xiàn)的一種多功能細胞因子,與IL-2(interleukin-2)共用IL-2R的β和γ亞單位,二者同屬四α螺旋細胞因子家族成員,具有許多相似的生物學功能。能促進T細胞、B細胞的增殖,激活自然殺傷(NK)細胞,提高細胞毒性T細胞活性。許多研究發(fā)現(xiàn),IL-15具有明顯的抗腫瘤效應(yīng),其抗腫瘤指數(shù)甚至高于IL-2,因此,IL-15比IL-2在腫瘤治療中更具應(yīng)用前景。

2、
　　 利用腫瘤細胞表面易于生物素化和鏈親和素與生物素能高效而超強結(jié)合-這兩個特性,制備鏈親和素(SA)標記的鼠白細胞介素-15融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,并研究其生物學功能。
　　 利用本室早期構(gòu)建pET24a-SA-L-mIL15和pET21a-mIL15-L-SA重組表達質(zhì)粒,本研究分別在大腸桿菌中表達融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,對所表達的蛋白分別采用鎳金屬螯合(Ni-NTA)層析和

3、陰離子交換(DEAE)層析進行純化,透析復性。MTT法檢測融合蛋白對ConA刺激的小鼠脾淋巴細胞增殖活性,流式細胞術(shù)(FCM)分析融合蛋白對生物素化的小鼠膀胱癌(MB49)細胞表面錨定修飾效率。
　　 SA-mIL15和mIL15-SA在大腸桿菌中實現(xiàn)了高效表達,目的蛋白分別約占細菌總蛋白的20％、35％。制備的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白純度均達到95％,并具有雙重活性,即:mIL15促進ConA激活的小鼠脾淋巴

4、細胞的增殖活性和SA介導的高效結(jié)合至表面已生物素化的MB49細胞的功能(表面錨定修飾效率均大于95％)。其中,SA-mIL15雙功能融合蛋白促進ConA激活的小鼠脾淋巴細胞增殖活性為lx106IU/mg,mIL15-SA活性為2x105IU/mg。
　　 SA/mIL15雙功能融合蛋白具有雙重活性,為mIL15表面錨定修飾的腫瘤細胞疫苗的研制打下了基礎(chǔ),同時也為hIL15表面錨定修飾的腫瘤細胞疫苗的臨床試驗提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)