降血壓和降膽固醇大豆肽的分離純化.pdf

1、有控制的大豆蛋白酶法水解是制備具有確切生理活性的大豆肽的有效途徑。本論文在以水解產(chǎn)物ACE抑制活性、膽固醇膠束溶解抑制活性為指標(biāo)優(yōu)化蛋白酶種類、大豆蛋白水解度的基礎(chǔ)上，采用大孔吸附樹脂、凝膠過(guò)濾色譜、離子交換色譜、反相高效液相(RP-HPLC)對(duì)得到的混合肽進(jìn)行分離純化，并最終采用LC-MS(質(zhì)譜)對(duì)分離得到的單一具有高活性的肽的氨基酸序列進(jìn)行了鑒定。 Alcalase水解得到的具有降膽固醇(DH18％)和降血壓(DH14％)作

2、用的大豆分離蛋白水解液通過(guò)DA201-C型大孔吸附樹脂脫鹽，同時(shí)采用不同濃度乙醇分級(jí)分離，得出在乙醇濃度達(dá)到75％時(shí)洗脫下來(lái)的組分具有最高的降膽固醇和降血壓活性，抑制率分別為63.53％和56.52％。這兩種組分經(jīng)SephadexG-15分離時(shí)，0.01mol/L的HCl溶液作為洗脫液對(duì)降膽固醇肽的分離有較好的效果；1mol/L的醋酸溶液作為洗脫液對(duì)降血壓肽的分離有較好的效果。測(cè)定SephadexG-15分離后各部分的活性，得出降膽固醇

3、肽組分2對(duì)膽固醇膠束溶解度的抑制活性最強(qiáng)，抑制率為73.21％；降血壓肽組分5的ACE抑制活性最強(qiáng)，抑制率為69.57％。 SP-SephadexC-25陽(yáng)離子交換劑對(duì)乙醇濃度為75％時(shí)從大孔吸附樹脂洗脫下來(lái)的大豆降血壓肽的色譜分離條件如下：SP-SephadexC-25對(duì)降壓肽的有效交換量大致是0.004g/mLIE；當(dāng)起始緩沖液為1M醋酸時(shí)，SP-SephadexC-25對(duì)大豆降血壓肽有最大的吸附效果，其吸附率為61.19％

4、；當(dāng)緩沖液的NaCl濃度為1M時(shí)，被離子交換劑所吸附的肽能夠被完全洗脫下來(lái)。經(jīng)SP-SephadexC-25分離后ACE抑制活性最高的組分是峰5，為62.75％，峰4和峰6也有較高的抑制活性，分別為61.76％和60.78％，三個(gè)峰的ACE抑制活性都較高，無(wú)法取舍最佳的活性組分。因此，與SephadexG-15的分離效果比較，SP-SephadexC-25在對(duì)大豆肽生物活性差別的分離上效果欠佳，實(shí)驗(yàn)不予采用。 大豆降血壓肽經(jīng)過(guò)制

5、備型RP-HPLC分離后主要得到11個(gè)組分峰，再經(jīng)分析型RP-HPLC純化得到具有最高ACE抑制活性的組分9-Ⅰ，抑制率為98.46％；大豆降膽固醇肽經(jīng)過(guò)制備型RP-HPLC分離后主要得到15個(gè)組分峰，其中組分7的降膽固醇活性最高，達(dá)到了90.34％。經(jīng)過(guò)LC-MS序列分析，降血壓組分9-Ⅰ的相對(duì)分子質(zhì)量為772.4，有三種可能的結(jié)構(gòu)：VISTGAEP、VLSTGAEP和ANSAGTVGP；降膽固醇組分7的相對(duì)分子質(zhì)量為629.4，也有