厚殼貽貝酶解物的制備及其降血壓肽的分離純化、結(jié)構(gòu)表征.pdf

1、貽貝是重要的世界性養(yǎng)殖品種，以新鮮貽貝為主要銷售形式，經(jīng)濟(jì)效益低；作為傳統(tǒng)的滋補(bǔ)食品，貽貝具有較高的營養(yǎng)價(jià)值和多種藥理功效。本文以厚殼貽貝為原料，采用酶水解技術(shù)制備厚殼貽貝蛋白多肽，經(jīng)超濾、凝膠過濾層析和RP-HPLC、質(zhì)譜測(cè)序等手段對(duì)活性肽成分進(jìn)行分離、純化、結(jié)構(gòu)表征，并通過體外試驗(yàn)驗(yàn)證，獲得厚殼貽貝降血壓肽。主要研究結(jié)果如下：
　　 分別用堿性蛋白酶(Alcalase2.4L)、中性蛋白酶(Neutrase)、風(fēng)味蛋白酶(F

2、lavourzyme)、胰蛋白酶（Trypsin）和復(fù)合蛋白酶(Promatex)對(duì)厚殼貽貝蛋白進(jìn)行水解，比較酶解物的水解度DH、蛋白質(zhì)回收率及ACE抑制率，確定出水解厚殼貽貝蛋白的酶源為堿性蛋白酶；在堿性蛋白酶水解厚殼貽貝蛋白單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)優(yōu)化，結(jié)合各因素對(duì)響應(yīng)值的影響順序，確定最優(yōu)酶解條件為[E]／[S]2.18％、pH8.8，溫度55℃，此條件下制備的厚殼貽貝酶解物的ACE抑制率為83.12％。

3、　　 采用5KD超濾膜對(duì)酶解物進(jìn)行初步分離，收集流出液，所得組分MCP在對(duì)ACE抑制的IC50由超濾之前的0.367mg/mL降為0.308mg/mL。將該初步純化的組分MCP進(jìn)一步通過SephadexG-10凝膠層析分離，以超純水為洗脫液洗脫，得到三個(gè)組分MCP-1、MCP-2和MCP-3，分別測(cè)其在對(duì)ACE抑制的IC50為0.739mg/mL、0.298mg/mL和0.163mg/mL，反復(fù)進(jìn)樣，選擇活性最高的峰MCP-3收集。對(duì)

4、MCP-3進(jìn)行活性穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，MCP-3對(duì)溫度、酸堿變化以及消化酶均有不同程度的耐受性，隨著溫度或酸堿條件的變化，其對(duì)ACE的抑制活性均有良好的穩(wěn)定性，體外模擬消化實(shí)驗(yàn)也表明MCP-3經(jīng)胃腸道酶系消化后仍會(huì)保持較穩(wěn)定的ACE抑制活性。此外，通過考察不同抑制劑濃度下，底物濃度變化與反應(yīng)速率的關(guān)系，研究得出MCP-3對(duì)ACE的抑制類型為競爭性抑制。
　　 對(duì)MCP-3利用半制備型RP-HPLC進(jìn)行進(jìn)一步的分離純化，得到5個(gè)