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文檔簡介
1、本文對湛江馬尾藻中提取的巖藻聚糖進(jìn)行研究,利用體外化學(xué)實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)綜合評價六種不同馬尾藻中的巖藻聚糖粗多糖降膽固醇活性,并對活性最佳的馬尾藻巖藻聚糖粗多糖進(jìn)行分離純化及測定其理化性質(zhì),探討不同級分巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞的降膽固醇作用及作用機(jī)理,已期為馬尾藻降膽固醇的作用研究提供理論依據(jù)。主要研究內(nèi)容如下:
(1)通過比較粗多糖對膽固醇膠束溶解度的抑制率、膽酸鹽結(jié)合率以及HepG2細(xì)胞內(nèi)總膽固醇水平的影響,綜合評價分別來自六
2、種馬尾藻(張氏、亨氏、圍氏、半葉、硇洲及全緣馬尾藻)的巖藻聚糖粗多糖降膽固醇活性,發(fā)現(xiàn)多糖含量、硫酸基含量、巖藻糖含量分別為33.37%、13.63%、7.91%的張氏馬尾藻巖藻聚糖粗多糖降膽固醇活性最佳。
(2)通過DEAE-52層析柱對張氏馬尾藻巖藻聚糖粗多糖進(jìn)行分級純化,獲得三個不同的巖藻聚糖級分ZF1、ZF2、ZF3,其多糖含量分別為58.29%、60.84%、54.26%;巖藻糖含量分別為4.94%、17.81%、2
3、6.01%;硫酸基含量分別為3.29%、19.39%、18.89%。采用糖腈乙酸酯衍生法處理巖藻聚糖后經(jīng)GC-MS測定單糖組成,三級分均含有Fuc(巖藻糖)、Xyl(木糖)、Glc(葡萄糖)、Man(甘露糖)、Rha(鼠李糖)和Gal(半乳糖),但百分含量各不相同。
(3)通過比較三種不同級分張氏馬尾藻巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞降膽固醇作用實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),ZF1、ZF2、ZF3三個級分的中高濃度(200μg/mL、800μg/mL)可
4、降低細(xì)胞內(nèi)TC水平(p<0.05),且作用24 h時效果優(yōu)于48 h,并且明確顯示ZF2級分作用效果最佳。從濃度和時間效應(yīng)上考察ZF2降膽固醇活性發(fā)現(xiàn),ZF2的降膽固醇活性具有一定的濃度和時間依賴性。中高濃度ZF2(200μg/mL、800μg/mL)可以降低HepG2細(xì)胞內(nèi)TC含量、促進(jìn)TBA排出、增加ApoA1分泌、減少ApoB分泌(p<0.05),而低濃度ZF2(50μg/mL)效果則相反;ZF2(800μg/mL)分別作用Hep
5、G2細(xì)胞0、12、24、36、48 h后,在24 h可以最大程度降低HepG2細(xì)胞內(nèi)TC水平、促進(jìn)TBA排出、增加ApoA1分泌、減少ApoB分泌(p<0.05),24 h后作用程度逐漸減小,直至恢復(fù)至正常水平。
(4)采用實(shí)時熒光定量PCR法測定巖藻聚糖對HepG2細(xì)胞中SREBP-2、LDLR、HMGCR、LXR-α、ABCA1、CYP7A1 mRNA表達(dá)量的影響,結(jié)果表明,50、200、800μg/mL ZF2作用Hep
6、G2細(xì)胞24 h后,各基因mRNA的表達(dá)量均有上升趨勢,但只有濃度為800μg/mL時,各基因mRNA的表達(dá)量均具有顯著性(p<0.01);在0、12、24、36、48 h五個時間點(diǎn)內(nèi),800μg/mL濃度的ZF2作用細(xì)胞24 h可以最大程度地促進(jìn)LDLR、HMGCR、LXR-α、ABCA1 mRNA的表達(dá)(p<0.05),48 h可最大程度地促進(jìn)CYP7A1 mRNA的表達(dá)(p<0.05)。推測張氏馬尾藻巖藻聚糖降膽固醇的機(jī)理可能是:
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