60Coγ射線對(duì)糖多孢紅霉菌M的誘變效應(yīng)研究.pdf

1、隨著抗生素耐藥菌日益增多,迫切需要新的抗菌藥物,酮內(nèi)酯類抗生素在抗感染耐藥菌方面最有希望。通過同源重組的方法敲除糖多孢紅霉菌A226染色體上KR6基因構(gòu)建了糖多孢紅霉菌M,合成了3-脫氧-3-羰基-紅霉內(nèi)酯B,一種新的酮內(nèi)類脂類化合物。然而其產(chǎn)量較低,而且產(chǎn)物沒有抑菌活性,需進(jìn)一步提高其產(chǎn)量及糖基化修飾產(chǎn)生出抑菌活性產(chǎn)物。
　　60Coγ射線輻射誘變既能獲得較高的突變率和較寬的突變譜,同時(shí)還有利于篩選新的突變型。本試驗(yàn)以糖多孢紅霉

2、菌M為出發(fā)菌株,以孢子為材料,試驗(yàn)初始糖多孢紅霉菌M的孢子懸液濃度為106個(gè)/mL,使用60Coγ射線為誘變?cè)?20％甘油吐溫、20％DMSO、1％吐溫20制備孢子懸液進(jìn)行輻照處理以純水為空白對(duì)照,稀釋涂平板法計(jì)數(shù),并根據(jù)計(jì)數(shù)結(jié)果計(jì)算致死率,選擇適宜的溶液制備孢子懸液和適宜的誘變劑量;采用適宜的誘變條件處理,并利用鏈霉素R3M抗性平板來篩選突變體,發(fā)酵培養(yǎng),取發(fā)酵液做枯草桿菌抑菌試驗(yàn),篩選突變體,計(jì)算有效突變率;并研究γ射線對(duì)糖多孢紅霉

3、菌M的誘變效應(yīng)。初步研究LiCl誘變及LiCl與60Coγ射線復(fù)合誘變糖多孢紅霉菌M的誘變效應(yīng)。
　　鏈霉素最低抑制濃度結(jié)果表明:隨著鏈霉素濃度的提高,鏈霉素對(duì)糖多孢紅霉菌M的抑制作用增強(qiáng),當(dāng)鏈霉素濃度達(dá)到100μg/mL時(shí)菌株生長完全被抑制,為最小抑制濃度。本試驗(yàn)采用90μg/mL的鏈霉素抗性平板來篩選抗性突變體,以增大突變株篩選幾率。
　　誘變篩選結(jié)果表明:糖多孢紅霉菌M對(duì)60Coγ射線敏感,劑量越高,存活率越低;使用2

4、0％甘油吐溫制備孢子懸液時(shí)60Coγ射線輻照誘變的效果較好,當(dāng)輻照劑量為400Gy時(shí),致死率為90.3％,選擇為適宜誘變劑量。通過400Gy60Coγ射線輻射結(jié)合90μg/mL鏈霉素抗性篩選獲得兩株具有抑菌活性產(chǎn)物的突變株,正突變率為1.67‰,均斜面轉(zhuǎn)接5代,其發(fā)酵產(chǎn)物抑菌活性基本穩(wěn)定。
　　誘變效應(yīng)觀察結(jié)果表明:60Coγ射線誘變可以引起糖多孢紅霉菌M的生理形態(tài)變化,篩選的1203株鏈霉素抗性突變株中有5株生理形態(tài)發(fā)生較大變化

5、,形態(tài)變異率達(dá)到4.16‰,突變株的孢子顏色、產(chǎn)孢時(shí)間、可溶色素、菌落致密性等與糖多孢紅霉菌M相比具有較大變化。
　　LiCl、LiCl與60Coγ射線復(fù)合誘變結(jié)果顯示:糖多孢紅霉菌M對(duì)LiCl比較敏感,隨著培養(yǎng)基中LiCl濃度增加,致死率增高;使用LiCl與60Coγ射線復(fù)合誘變具有協(xié)同作用。
　　通過60Coγ射線誘變結(jié)合鏈霉素抗性篩選的方法篩選突變體,可以顯著提高菌落形態(tài)變異率及正突變率。而且通過γ射線誘變得到的突變菌