RMP在60Coγ-射線誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞DNA修復(fù)中的作用.pdf

1、目的：
　　研究肝癌細(xì)胞抵抗60Coγ-射線引起的凋亡的機(jī)制，探索RMP在肝癌細(xì)胞抵抗60Coγ-射線引起的DNA損傷程度中的影響，分析RMP在肝癌細(xì)胞抵抗輻射引起的DNA損傷和凋亡的作用機(jī)制
　　方法：
　　1.流式細(xì)胞術(shù)確認(rèn)肝癌細(xì)胞（7721、HepG2）與正常肝細(xì)胞（7702、L02）在抵抗60Coγ-射線損傷引起的凋亡方面的差異。
　　2.運(yùn)用彗星電泳檢測肝癌細(xì)胞（7721、HepG2）與正常肝細(xì)胞（77

2、02、L02）在60Coγ-射線處理后不同時間點(diǎn)的損傷和修復(fù)
　　3.以γH2AX作為指標(biāo)，用免疫熒光法檢測肝癌細(xì)胞與正常肝細(xì)胞在不同時間點(diǎn)的損傷程度從而確認(rèn)上述結(jié)果。
　　4.利用qRT-PCR技術(shù)檢測不同時間點(diǎn)各個細(xì)胞中的RMP的野生型表達(dá)。
　　5.在肝癌細(xì)胞7721細(xì)胞中通過瞬轉(zhuǎn)RMP后，利用彗星電泳技術(shù)以及免疫熒光技術(shù)檢測不同時間點(diǎn)的損傷和修復(fù)
　　6.在正常肝細(xì)胞7702細(xì)胞中通過瞬轉(zhuǎn)不同的質(zhì)粒進(jìn)入到

3、細(xì)胞中改變7702細(xì)胞的RMP表達(dá)，利用彗星電泳技術(shù)檢測不同時間點(diǎn)的損傷修復(fù)
　　結(jié)果：
　　1.凋亡結(jié)果顯示肝癌細(xì)胞（7721、HepG2）在60Coγ-射線處理后早期凋亡的出現(xiàn)比正常肝細(xì)胞（7702、L02）要晚，而且凋亡的程度要低于正常肝細(xì)胞。證明肝癌細(xì)胞要比正常肝細(xì)胞對γ-射線引起的凋亡更不敏感。
　　2.彗星電泳技術(shù)檢測出的結(jié)果發(fā)現(xiàn)肝癌細(xì)胞與正常肝細(xì)胞在開始的時候的損傷差別并不大，但是在30min-1h時肝癌

4、細(xì)胞（7721、HepG2）的損傷修復(fù)速度要快于正常肝細(xì)胞（7702、L02）,且修復(fù)后損傷程度較后者要低。
　　3.免疫熒光的結(jié)果顯示肝癌細(xì)胞（7721）與正常肝細(xì)胞（7702）在損傷細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)比例上的無差異，但是在每個細(xì)胞中的DNA損傷程度有差異，肝癌細(xì)胞的每個細(xì)胞中的γH2AX點(diǎn)平均在1h左右降低到比較低的值，比正常肝細(xì)胞要快且同一時間點(diǎn)γH2AX的點(diǎn)數(shù)要低于正常肝細(xì)胞，這與彗星電泳的結(jié)果相符，進(jìn)一步證明了損傷修復(fù)的結(jié)

5、果可靠性。
　　4.qRT-PCR結(jié)果顯示在1h肝癌細(xì)胞中的RMP表達(dá)量升到最高，正常肝細(xì)胞中的RMP表達(dá)無明顯變化。
　　5.發(fā)現(xiàn)彗星電泳檢測到的肝癌細(xì)胞中的DNA的修復(fù)速度較之前更快，而且相同時間點(diǎn)檢測到的DNA損傷程度，過表達(dá)RMP的7721-O瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞系要低于對照組7702細(xì)胞系。干擾RMP后發(fā)現(xiàn)瞬轉(zhuǎn)了干擾質(zhì)粒的7721-RI瞬轉(zhuǎn)細(xì)胞系的DNA修復(fù)過程受到阻礙，免疫熒光技術(shù)檢測到的γH2AX指標(biāo)顯示的結(jié)果顯示RMP能

6、增強(qiáng)肝癌細(xì)胞的損傷修復(fù)速度，這與彗星電泳檢測的結(jié)果相符。qRT-PCR顯示各質(zhì)粒在細(xì)胞中得到了預(yù)期的表達(dá)。
　　6.RMP的表達(dá)量變化對于正常肝細(xì)胞7702細(xì)胞的DNA修復(fù)能力沒有明顯的影響。
　　結(jié)論：
　　本課題發(fā)現(xiàn)RMP的表達(dá)和肝癌細(xì)胞的DNA的損傷修復(fù)有著明顯的線性關(guān)系， RMP能夠促進(jìn)肝癌細(xì)胞的 DNA損傷修復(fù)，但是在正常肝細(xì)胞中卻沒有顯示出促進(jìn)DNA修復(fù)的結(jié)果。且肝癌細(xì)胞的野生型表達(dá)也顯示出了抑制凋亡的結(jié)果