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1、目的:研究苦參堿(matrine,Mat)對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2核因子-κB(nuclear factor-kappaB,NF-κB)表達(dá)的影響以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC)抑制核因子-κB活化對(duì)苦參堿誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的影響。 方法:MTT法觀察Mat組(0.8、1.0、 1.5、2.0、2.5 g/L)及聯(lián)合組(PDTC+Mat組)對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用;1
2、.5g/L Mat作用HepG2細(xì)胞3h、6h、12h、24h后,采用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察細(xì)胞中NF-κB的活化與分布,電泳遷移率變動(dòng)分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB蛋白含量。將HepG2細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶,隨機(jī)分為對(duì)照組、PDTC組(20μmol/L)、Mat組(1.5g/L)和聯(lián)合組:PDTC(20μmol/L)+Mat(1.5g/L)組,作用3小時(shí)后,分別
3、采用免疫細(xì)胞化學(xué)法和電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)觀察和檢測(cè)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)水平;作用12小時(shí)后,用流式細(xì)胞儀和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)檢測(cè) HepG2細(xì)胞凋亡。 結(jié)果: 1.一定濃度的Mat可抑制HepG2細(xì)胞增殖并且抑制作用呈時(shí)
4、間和劑量依賴性;PDTC增強(qiáng)了Mat對(duì)細(xì)胞增殖的抑制作用。 2.Mat作用不同時(shí)間能夠不同程度地使細(xì)胞核中NF-κB免疫組化染色增強(qiáng)。對(duì)照組NF-κB在HepG2細(xì)胞胞漿中表達(dá),Mat刺激后轉(zhuǎn)入核內(nèi),胞核胞漿均陽性表達(dá)。PDTC作用后.再用Mat刺激,HepG2細(xì)胞核及細(xì)胞漿內(nèi)NF-κB的表達(dá)減弱。 3.EMSA檢測(cè)結(jié)果顯示:Mat作用不同時(shí)間能不同程度的誘導(dǎo)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的表達(dá),各組的蛋白表達(dá)水平均高于對(duì)照組(P<
5、0.01),且苦參堿作用6h誘導(dǎo)NF-κB活化達(dá)高峰。PDTC組NF-κB蛋白表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.01),聯(lián)合組核內(nèi)NF-κB表達(dá)高于對(duì)照組(P<0.01),但明顯低于Mat組(P<0.01)。 4.各組凋亡率分別為:對(duì)照組(2.41±0.74)%,PDTC組(3.07±0.46)%,Mat組為(6.11±0.81)%,PDTC+Mat組為(12.95±2.26)%。 結(jié)論:苦參堿可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡,亦可誘
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