苦參堿通過Bid誘導AIF入核引起肝癌細胞凋亡的機制.pdf

1、廈門大學學位論文原創(chuàng)性聲明本人呈交的學位論文是本人在導師指導下，獨立完成的研究成果。本人在論文寫作中參考其他個人或集體己經(jīng)發(fā)表的研究成果，均在文中以適當方式明確標明，并符合法律規(guī)范和《廈門大學研究釁黧篡≥勰啪橢一另外，該學位論文為(才滔礅1中I√欷豫)課題(組)的研究成果，獲得(胡夭鞍)課題(組)經(jīng)費或?qū)嶒炇业馁Y助，在(嘲戈瓢)實驗室完成。(請在以上括號內(nèi)填寫課題或課題組負責人或?qū)嶒炇颐Q，未有此項聲明內(nèi)容的，聲明人(簽名)：同歡2DJ

2、弓年6月r日摘要肝癌是一種常見的惡性腫瘤，它嚴重威脅著人類的健康。然而，由于肝癌本身所具有的生物學特性，使其成為目前尚缺乏有效治療手段的疾病?？鄥A是從我國傳統(tǒng)中藥苦參的干燥根中提取出的一種生物堿活性成分，分子式為C15H24N20，具有廣泛的藥理學作用。近年來的研究表明，苦參堿能在體內(nèi)、外對多種腫瘤細胞起作用，誘導腫瘤細胞凋亡。然而，苦參堿誘導腫瘤細胞凋亡的作用機制還不明確。本論文以人肝癌細胞系HepG2及裸鼠荷肝癌模型為研究對象，探

3、討苦參堿的抗腫瘤作用及原理。通過MTT法、PI染色法、流式細胞術(shù)，闡明了苦參堿對肝癌的增殖抑制、周期調(diào)控、誘導凋亡作用；使用WestemBlot、免疫熒光和免疫組化等方法全面探索了苦參堿誘導肝癌細胞凋亡可能的分子機制。論文研究表明，苦參堿在體外可抑制HepG2細胞的增殖作用和誘導凋亡，呈時間和劑量依賴性，將細胞周期阻滯在G0／G1期。同時研究發(fā)現(xiàn)，苦參堿可誘導Fas、FasL表達上調(diào)，Bid、Bcl一2表達下調(diào)，Bax表達上調(diào)和Casp

4、ase通路激活，這些結(jié)果表明苦參堿在體外是依賴于多條凋亡通路來誘導人肝癌細胞發(fā)生凋亡。苦參堿還能引起線粒體膜電位崩潰，ROS活性增高，核Bid轉(zhuǎn)位到細胞質(zhì)，部分Bid還可以轉(zhuǎn)位到線粒體，AIF從線粒體轉(zhuǎn)位至細胞核。但不論是苦參堿誘導ROS的產(chǎn)生受抑制，還是Bid／AIF的表達受抑制，都可阻止苦參堿誘導的細胞凋亡。同時，Tiron抑制ROS產(chǎn)生后，還可阻止由苦參堿誘導的AIF核轉(zhuǎn)位作用。此外，采用Bid抑制劑BI6C9和siRNA靜默技術(shù)

5、下調(diào)Bid蛋白表達，都可阻止AIF由線粒體轉(zhuǎn)位至核內(nèi)，提示苦參堿可通過Bid調(diào)控AIF入核誘導人肝癌HepG2細胞凋亡。最后，建立裸鼠皮下成瘤模型，證實有效劑量的苦參堿可以在裸鼠體內(nèi)抑制HepG2細胞的增殖生長，并同步觀察到Bid表達水平下調(diào)和AIF轉(zhuǎn)位入核。通過這些研究，較為詳細地闡明了苦參堿在體內(nèi)外對人肝癌細胞存活增殖的抑制作用與機制，為其作為基于Bid／AIF分子靶點的抗肝癌藥物開發(fā)奠定理論基礎(chǔ)，也為苦參堿在癌癥治療的臨床應(yīng)用提供