苦參堿誘導(dǎo)U937細(xì)胞分化及其相關(guān)機(jī)制的研究.pdf

1、目的：白血病是常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，基本特征為細(xì)胞增殖過(guò)度，分化受阻和凋亡障礙。U937細(xì)胞是常用于基礎(chǔ)研究的單核細(xì)胞白血病細(xì)胞株。目前治療白血病仍以化學(xué)藥物為主，但大部分此類(lèi)藥物選擇性差，毒副作用大，對(duì)正常機(jī)體免疫與造血系統(tǒng)有較大的損害。所以，尋找選擇性高和毒副作用小的藥物是目前提高臨床療效的重要途徑。苦參堿（Matrine，C15H24N2O）是豆科槐屬植物中分離出來(lái)的一種生物堿，盛產(chǎn)于我國(guó)西部。多年來(lái)的藥理和臨床研究中發(fā)現(xiàn)苦參堿有抗

2、病毒、抗炎、抗心律失常、抗腫瘤等作用。有研究報(bào)道Mat能誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞向正常細(xì)胞分化，尚未見(jiàn)其對(duì)U937細(xì)胞誘導(dǎo)分化的相關(guān)研究。 本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)細(xì)胞毒力實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞周期的改變觀察苦參堿對(duì)U937細(xì)胞增殖的影響；結(jié)合細(xì)胞功能學(xué)、細(xì)胞形態(tài)學(xué)及表面抗原的變化評(píng)價(jià)細(xì)胞分化；通過(guò)細(xì)胞周期蛋白及其抑制物的蛋白表達(dá)情況初步探討苦參堿誘導(dǎo)U937細(xì)胞分化的機(jī)制。 方法：1.采用臺(tái)盼藍(lán)拒染法研究Mat體外對(duì)U937細(xì)胞增殖的影響，并觀察細(xì)胞活力

3、以選擇藥物的誘導(dǎo)分化濃度，流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)細(xì)胞周期的變化。 2.通過(guò)硝基四氮唑藍(lán)（NBT）還原實(shí)驗(yàn)檢測(cè)U937細(xì)胞功能學(xué)改變，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面分化抗原CD11b、CD14變化，倒置顯微鏡及光鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變?cè)u(píng)價(jià)細(xì)胞分化。 3.免疫細(xì)胞化學(xué)法及Western Blot檢測(cè)cyclin E、cyclin A、p21 Waf1/Cip1蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：1.苦參堿能有效抑制U937細(xì)胞的增殖，0

4、.1mg/mL Mat作用48h后U937細(xì)胞生長(zhǎng)明顯受抑，其抑制作用呈時(shí)間和劑量依賴(lài)性。0.2mg/mL Mat作用不同時(shí)間后，G0/G1期細(xì)胞減少，S期細(xì)胞增多。 2.0.2mg/mL Mat作用U937細(xì)胞后可使細(xì)胞NBT陽(yáng)性率及CD11b表達(dá)率增高，細(xì)胞聚集、貼壁，并可見(jiàn)偽足形成，光鏡下細(xì)胞核漿比減少，核仁變模糊，染色質(zhì)由疏松傾向致密。 3.免疫細(xì)胞化學(xué)法及Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示苦參堿作用后細(xì)胞cy

5、clin E、cyclinA蛋白表達(dá)下調(diào)，p21 Waf1/Cip1蛋白表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論：1.Mat對(duì)U937細(xì)胞具有增殖抑制作用，呈量-效和時(shí)-效依賴(lài)關(guān)系；能使細(xì)胞發(fā)生S期阻滯。 2.一定濃度Mat作用一定時(shí)間后，能使U937細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞功能學(xué)、形態(tài)學(xué)、表面抗原的變化，誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生部分分化。 3.Mat誘導(dǎo)U937細(xì)胞分化的機(jī)制可能與細(xì)胞周期調(diào)控蛋白cyclin E、cyclin A表達(dá)下調(diào)及p21Waf1/C