血小板因子-4抑制U937細(xì)胞增殖的機(jī)理研究.pdf

1、血小板因子4(Plateletfactor4，PF4)是作用最強(qiáng)的抑制血管增生的趨化因子，但其作用機(jī)理一直不明，可能與以下三種機(jī)理相關(guān)：1.通過(guò)與蛋白多糖的結(jié)合來(lái)干擾蛋白多糖對(duì)生長(zhǎng)因子活性的作用；2.直接與血管增生刺激因子結(jié)合，以抑制它們與相應(yīng)受體的作用；3.通過(guò)活化或結(jié)合細(xì)胞表面的受體，啟動(dòng)相應(yīng)的負(fù)調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。本研究首次發(fā)現(xiàn)PF4可以在體外直接抑制人淋巴瘤細(xì)胞系U937的生長(zhǎng)，但對(duì)人白血病細(xì)胞系K562、HL-60卻無(wú)明顯影響。

2、構(gòu)建PF4突變體(PTA37/38/39AVP、R49S、L55R、A57V)并檢測(cè)它們對(duì)U937細(xì)胞的增殖影響，結(jié)果顯示除A57V之外，其余3個(gè)突變體均失去抑制U937細(xì)胞增殖的活性，這3個(gè)突變體除R49S與肝素結(jié)合相關(guān)外，其余2個(gè)均與肝素結(jié)合無(wú)關(guān)，說(shuō)明PF4抑制U937細(xì)胞生長(zhǎng)與第37、38、39、49、55位的氨基酸密切相關(guān)，且這種抑制作用可能是非肝素依賴性的。這提示PF4抑制U937細(xì)胞增殖可能與第三種機(jī)理相關(guān)。2003年，La

3、sagni等首次報(bào)道了PF4的唯一受體CXCR3-B，PF4與CXCR3-B結(jié)合，可抑制內(nèi)皮細(xì)胞的增殖，為研究PF4抑制腫瘤生長(zhǎng)的機(jī)理提供了新的思路。本研究旨在以CXCR3-B為線索，探討PF4抑制腫瘤細(xì)胞增殖的可能的作用機(jī)理。首先制備了兔/鼠抗人CXCR3-B分子的多/單克隆抗體，并通過(guò)三個(gè)不同區(qū)段的多肽對(duì)單克隆抗體的抗原表位進(jìn)行了初步的篩選。共獲得三種針對(duì)不同區(qū)段的多肽的多/單克隆抗體，這些抗體為進(jìn)行有關(guān)PF4抑制U937細(xì)胞增殖的

4、作用機(jī)理研究奠定了基礎(chǔ)。第二，通過(guò)RT-PCR、免疫印跡及免疫沉淀的方法證實(shí)U937細(xì)胞表達(dá)CXCR3-B分子，Pull-down、流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果證明PF4可識(shí)別CXCR3-B分子并與之結(jié)合，說(shuō)明PF4抑制U937細(xì)胞的增殖可能是通過(guò)CXCR3-B介導(dǎo)的。第三，通過(guò)蛋白組學(xué)和基因芯片的實(shí)驗(yàn)技術(shù)對(duì)PF4作用于U937細(xì)胞后的蛋白及表達(dá)變化基因進(jìn)行了初步的篩選。結(jié)果顯示PF4可從U937細(xì)胞總蛋白中富集分子量約為75kDa的蛋白，此蛋白可