核糖體蛋白RPL36AsiRNA對U937細(xì)胞增殖、凋亡的影響.pdf

1、【目的】 檢測RPL36A基因在急性髓系白血病初治病人、正常人單個核細(xì)胞、U937細(xì)胞的表達(dá)情況及其對U937細(xì)胞增殖與凋亡的作用。 【方法】 采用RT-PCR檢測急性髓系白血病、正常人單個核細(xì)胞、U937細(xì)胞RPL36A基因的表達(dá)情況；采用人工化學(xué)合成的RPL36AsiRNA，經(jīng)LipofectamineTM 2000脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染入U937細(xì)胞，應(yīng)用四唑鹽(MTT)法檢測細(xì)胞的增殖情況，AO-EB、TUNEL

2、、Annexin V/FITV檢測細(xì)胞凋亡情況，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)DNA倍體分析細(xì)胞周期，RT-PCR和Western blot檢測RPL36AsiRNA作用前后RPL36A基因mRNA及蛋白表達(dá)水平的變化。 【結(jié)果】 RPL36A在急性髓系白血病初治病人(RPL36A/actin 1.0546±0.22892)與U937細(xì)胞(RPL36A/actin 1.1642±0.1112)中表達(dá)明顯增高，而正常人單個核細(xì)胞(RPL3

3、6A/actin 0.3227±0.1528)低表達(dá)，差異具有顯著性意義。RPL36AsiRNA能明顯抑制U937細(xì)胞增殖，半數(shù)抑制濃度IC50約為150nM。 (1)MTT法檢測轉(zhuǎn)染RPL36AsiRNA的U937細(xì)胞組24h、48h、72h、96h吸光度值(A值)分別為0.266±0.027、0.3154±0.0102、0.391±0.0099、0.418±0.0142，與對照組比較明顯降低，細(xì)胞生長抑制率明顯增高；

4、 (2)AO/EB染色、原位細(xì)胞凋亡檢測顯示轉(zhuǎn)染RPL36AsiRNA的細(xì)胞組凋亡率較對照組增高；AnnexinV/FITV檢測顯示轉(zhuǎn)染RPL36AsiRNA作用于U937細(xì)胞24h、48h、72h后凋亡率分別為25.31±3.01％、35.78±2.30％、53.25±2.71％；DNA倍體分析檢測出轉(zhuǎn)染RPL36AsiRNA的細(xì)胞組24h(％G2+S 34.6±1.8)、48h(％G2+S 26.84±2.8)、72h(％G2+S